[发明专利]一株基因VII型鸡新城疫病毒毒株的分离鉴定和纯化方法及其应用

说明书

本发明涉及动物病毒学领域，本发明提供了一株基因VII型鸡新城疫病毒毒株的分离鉴定和纯化方法及其应用，具体提供了一株基因VII型(Class II)的鸡新城疫病毒株Chicken/China/SD06/2014，其保藏编号为：CCTCC NO：V201544，并提供了该毒株的分离、鉴定和纯化的方法以及该毒株的部分生物学性质，分析了该毒株的系统进化和蛋白变异情况，以明确其作为新城疫疫苗侯选毒株和HA‑HI实验抗原的可行性，从而为新城疫病毒的分子进化和流行病学研究提供资料。

技术领域

本发明涉及动物病毒学领域，本发明提供了一株基因VII型鸡新城疫病毒毒株的分离鉴定和纯化方法及其应用。

背景技术

新城疫病毒(NDV)隶属于副粘病毒科中的I型禽副粘病毒，是一组单股负链的RNA病毒。该病毒可导致家禽和野鸟的新城疫，对养禽业造成严重的危害。NDV基因组全长15.2kb，编码6个主要的结构蛋白(3’-NP-P-M-F-HN-L-5’)和2个非结构蛋白(V和W)。HN和F蛋白位于病毒的表面，与病毒的感染性、致病性和抗原性密切相关。F蛋白还被广泛的用于NDV的系统进化分类。目前NDV统一的基因型分类系统将该病毒分为2个群(Class)，其中Class I分为2个基因型，多为野鸟中分离的毒株；Class II分为18个基因型。

根据致病性和感染宿主后临床症状的差异，可以将NDV分为强毒毒株，中等毒力毒株和弱毒株。F蛋白裂解位点的氨基酸序列是NDV毒力划分的分子基础。若F蛋白裂解位点存在多碱性氨基酸序列，则可被宿主的泛素样蛋白酶所裂解，从而促进病毒在宿主体内的复制和系统性感染。此外，鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种指数(ICPI)可用作NDV对鸡致病性的判断标准。分子流行病学的资料表明，我国鸡群和鸭群中流行的NDV强毒株主要属于Class II中的基因VII型，鸽群中流行的NDV强毒株主要是Class II中的基因VI型，而野鸟中流行的主要是Class I弱毒株。

中国以及其他很多国家采用疫苗免疫的方式来防控家禽新城疫。LaSota属于Class II中的基因II型，是目前应用最为广泛的NDV疫苗株。随着NDV持续不断的变异，有报道表明该疫苗虽然能防止感染NDV后免疫家禽的发病，但是不能抑制排毒：病毒仍然能够在感染后数天内通过喉头/泄殖腔排泄到环境中，从而导致病毒的持续传播和感染；也有报道称在某些基因VII型NDV强毒株感染后，LaSota免疫的鸡群仍然会有发病和死亡。因此，通过持续的新城疫病毒流行病学研究及时的发现优势流行毒株，研究其特性，并最终筛选出可以作为疫苗株的毒株是保证新城疫疫苗效果的最重要方式之一。

发明内容

本发明的发明人提供了一株基因VII型(Class II)的鸡新城疫病毒株Chicken/China/SD06/2014，提供了该毒株的分离、鉴定和纯化的方法以及该毒株的部分生物学性质，分析了该毒株的系统进化和蛋白变异情况，以明确其作为新城疫疫苗侯选毒株和HA-HI实验抗原的可行性，从而为新城疫病毒的分子进化和流行病学研究提供资料。

发明人对该毒株进行了生物保藏，其保藏编号为：CCTCC NO：V201544。

该病毒的HN和F相关基因序列如序列表中所示(HN核苷酸序列如Seq ID No:1所示，其氨基酸序列如Seq ID No:3所示；F基因核苷酸序列如Seq ID No:2所示，其氨基酸序列如Seq ID No:4所示)。该毒株推导的F蛋白裂解位点的氨基酸序列为RRQKRF，含有多个碱性氨基酸，因此可判定为一株NDV强毒株。该病毒在系统进化上隶属于Class II中的基因VII型。病毒与国内NDV优势流行株具有相似的的表面蛋白特征，而与LaSota相比，其在F蛋白功能域的多个区域存在氨基酸的变异，在HN蛋白的跨膜功能域和中和抗原表位也存在氨基酸突变，因此与LaSota相比更适合作为疫苗株。

针对该病毒遗传背景，发明人采用的分离及鉴定方法如下：