[发明专利]用于检测查加斯病的抗原组合物

说明书

本发明涉及由三种多肽1F8、JL7和Cruzipain组成的适用于检测分离的生物样品中针对克氏锥虫(Trypanosoma cruzi,T.cruzi)的抗体的多肽的组合物。产生适用于使用所述多肽的组合物检测针对克氏锥虫的抗体的多肽的可溶性和免疫反应性组合物的方法也是本发明的一部分。此外，本发明涉及用于检测分离的样品中对克氏锥虫特异性的抗体的方法(其中使用所述克氏锥虫多肽的组合物)以及包含所述克氏锥虫多肽的组合物的试剂盒。

查加斯病是由鞭毛虫原生动物克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)引起的热带寄生虫病。克氏锥虫通常通过昆虫载体(即锥猎蝽亚科(subfamily Triatominae)(猎蝽科(familyReduviidae)，德文：“Raubwanzen”)的吸血“亲吻虫”)传播给人类和其他哺乳动物。该疾病也可通过输血和器官移植、摄入被寄生虫污染的食物传播以及从母亲传播到胎儿。

克氏锥虫以不同形式和发育阶段出现。繁殖形式被称为短膜虫期(epimastigote)，其恰好在接吻虫已经在包括人类的被感染的动物上吸血后适应。短膜虫移动到该虫的直肠细胞壁上。该虫在随后的吸血（其中该虫排便）中经由其粪便将病原体转移至下一宿主。感染形式被称为锥鞭毛体，并通过咬伤进入人体。因此，可以在人血中发现锥鞭毛体。发现的另一种形式(例如在心肌细胞的细胞质中发现的另一种形式)称为无鞭毛体或微鞭毛体(micromastigote)。在克氏锥虫的生命周期期间，无鞭毛体变为锥鞭毛体，其可以在下一次吸血中被亲吻虫吸入。

查加斯病的症状在感染过程中有所不同。通常存在急性期，随后是慢性期。感染后也可存在潜伏期。各期可以无症状或威胁生命。在早期、急性期，症状通常是轻度的，通常在感染部位仅仅产生局部肿胀。初始急性期对抗寄生虫治疗有反应，治愈率为60-90％。4-8周后，具有活动性感染的个体进入查加斯病的慢性期，其对于慢性感染个体的60-80％在其整个寿命中无症状。在慢性期期间，一些患者发生心脏并发症，导致心脏扩大、心力衰竭、心率改变和猝死。导致进食或通便困难的肠道并发症也是慢性期典型的。

抗寄生虫治疗也似乎延缓或预防疾病慢性期期间的疾病症状的发展，但根据美国疾病控制与预防中心，发展这些并发症中的一种或多种的平均寿命风险为约30％，这意味着这些慢性感染的个体仍将最终发展威胁生命的心脏和消化系统病症。目前可用的查加斯病的抗寄生虫治疗是苄硝唑和硝呋莫司，其可以在许多患者中引起临时副作用，包括皮肤病症、脑毒性和消化系统刺激。

查加斯病主要出现在墨西哥、中美洲和南美洲的贫困农村地区；非常罕见地，该疾病在美国南部被发现。然而，通过这些国家的体外诊断方法，筛选献血者被克氏锥虫的感染。

如今几种血清学诊断方法可用来检测克氏锥虫的感染，例如，通过间接免疫荧光、间接血细胞凝集、补体固定、免疫印迹技术和ELISA检测针对克氏锥虫的抗体。还应用分子生物学方法(例如PCR)和复杂的媒介生物诊断方法。在媒介生物诊断法中，使载体传播的感染物，实验室培育的、无病原体昆虫(此处为：接吻虫)从患者吸取血液。然后检查昆虫的肠内容物中病原体(此处为：克氏锥虫)的存在。

这些方法中的每一种在灵敏度和特异性方面都显示出其自身的弱点和优势，因此目前还没有可用的金标准方法。

在开始开发查加斯测定法用于检测抗体中，应用了且仍正在使用天然抗原裂解物。然而，使用裂解物，在该抗原组合物中仅代表克氏锥虫的三个发育阶段之一，使得存在错过其他两个阶段的感染的特定可能性。更现代的测定法应用代表克氏锥虫感染的所有阶段的重组抗原的混合物。

当使用天然抗原裂解物时，诊断测定法经常面临在另一种寄生虫利什曼原虫感染的患者样品中观察到的特异性和交叉反应性中的问题。此外，由于克氏锥虫的复杂抗原组成，抗原裂解物的产生导致相当大的批次间变化。此外，非常经常地，基于天然裂解物的稀有试剂显示弱灵敏度，因为一些裂解物完全不含或不含足够的所有生命周期阶段的抗原。