[发明专利]BRAF继发突变的耐药胃肠道间质瘤细胞系及裸鼠模型构建

说明书

本发明涉及一种BRAF继发突变的耐药胃肠道间质瘤细胞系及裸鼠模型构建。保藏名为甲磺酸伊马替尼耐药胃肠道间质瘤细胞系GIST‑1114，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号:CCTCC NO:C201501。所述GIST‑1114细胞系包含KIT基因exon11 V559D原发突变和BRAF基因exon15 V600E继发突变；GIST‑1114耐药细胞系的移植瘤模型的组织形态学特征：发生耐药后组织形态学和免疫表型均发生了变化，从梭形细胞型变成混合细胞型，部分区域可见横纹肌肉瘤分化，横纹肌肉瘤分化区域CD117阴性表达，但是Desmin和Myogenin呈现阳性表达。本发明可以用于解决临床上部分GIST无KIT基因二次突变的imatinib继发耐药的问题。

技术领域

本发明属肿瘤生物学领域，涉及一种胃肠道间质瘤耐药细胞系。

背景技术

胃肠道间质瘤（gastrointestinal stromal tumor，GIST）是位于胃肠道或腹腔内的表达KIT（CD117）蛋白的间叶源性肿瘤，绝大多数存在KIT基因的功能获得性突变，KIT基因突变在GIST发病过程中发挥关键的作用。Imatinib是一种口服的ATP的竞争性抑制剂，能竞争性地结合于KIT酪氨酸激酶功能区的ATP结合位点，阻断磷酸基团从ATP上转移到蛋白质底物（KIT，PDGFRA，ABL以及BCR-ABL融合蛋白）的酪氨酸残基，从而阻断了失控的信号传导通路，进而阻止细胞的持续增殖，并恢复细胞的正常凋亡程序，是靶向治疗胃肠道间质瘤的重要药物。然而一般在Imatinib平均治疗24个月后，将产生耐药，因此研究肿瘤耐药机制以及防止或逆转肿瘤耐药的发生对于提高靶向治疗效果十分重要。近年来，肿瘤耐药细胞系己成为重要的工具，大量研究利用它来揭示肿瘤细胞的耐药机制、研究肿瘤细胞的耐药性逆转、开发及评价新的抗癌方法等。建立肿瘤耐药细胞系具有重要应用价值。

发明内容

本发明的目的是建立胃肠道间质瘤Imatinib耐药细胞系，为以下相关研究提供耐药肿瘤细胞模型:研究耐药肿瘤细胞形态学及生物学特点、研究肿瘤多药耐药机制、分析靶向治疗药物敏感性及筛选靶向治疗药物、开发肿瘤耐药逆转药物、研发更有效的肿瘤治疗方法等。

一种BRAF继发突变的耐药胃肠道间质瘤细胞系，保藏名为

甲磺酸伊马替尼耐药的胃肠道间质瘤细胞系GIST-1114，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号: CCTCC NO: C201501，保藏日期：2015年1月22日；地址：湖北省武汉市武昌区武汉大学，邮编430072。

所述GIST-1114细胞系包含KIT基因exon11 V559D原发突变和BRAF基因exon15V600E继发突变；GIST-1114耐药细胞系的移植瘤模型的组织形态学特征：发生耐药后组织形态学和免疫表型均发生了变化，从梭形细胞型变成混合细胞型，部分区域可见横纹肌肉瘤分化，横纹肌肉瘤分化区域CD117阴性表达，但是Desmin和Myogenin呈现阳性表达。

一种采用所述的细胞系的裸鼠移植瘤模型的构建方法，建立步骤如下：

实验动物BALB /C /nu /nu品系裸鼠，无特殊病原体级, 雌雄不限, 鼠龄3～4周,体重19.0 ± 2.0g；GIST-1114细胞系接种5只裸鼠，均接种于背部皮下；其饲养和实验均在无特殊病原体环境中进行；

耐药GIST细胞接种裸鼠：收集耐药GIST细胞系数目约1×10⁷接种于裸鼠背部皮下，次日记为接种第1天；每日观察荷瘤鼠饮食情况、精神状态、肿瘤大小与外观，用游标卡尺每10天测量一次裸鼠体重（g）和肿瘤的最长纵径（a）、与最长径垂直的最长横径（b），根据公式V（肿瘤体积）=（1/2）×ab²计算出肿瘤体积，绘制移植瘤生长曲线；经过中位时间约21天的生长静息期后，肿瘤生长速度逐渐加快，随着接种时间的推移，肿瘤的生长逐渐加速，肿瘤体积逐渐增大；从接种日期起，每10天计算移植瘤的体积描绘肿瘤生长曲线，GIST-1114细胞成瘤率60%。