[发明专利]猪伪狂犬病毒gG的ELISA检测试剂盒

权利要求书

1.一种猪伪狂犬病毒gG的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含包被有猪伪狂犬病毒gG蛋白重组抗原的酶标板；

所述gG蛋白重组抗原的制备方法如下：以猪伪狂犬病毒中国流行株的gG蛋白编码基因为模板，利用引物对扩增得到gG蛋白基因片段，构建重组表达载体，将所述重组表达载体转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)中，加IPTG进行诱导表达；将表达产物通过His-Tag镍柱亲和层析法纯化后，获得纯化的gG蛋白重组抗原；

所述引物对包括：

上游引物：ATGAATTCAGAGAGGCCCCTCGGGA；

下游引物：TAAAGCTTGGCCGCGGGCGAGCCCAC；

所述包被有猪伪狂犬病毒gG蛋白重组抗原的酶标板的制备方法包括如下步骤：

1)用0.05M pH9.6的碳酸钠缓冲液稀释gG蛋白重组抗原，加入酶标板孔中，包被量为0.1-1ug/孔；

2)将酶标板用封板膜覆盖，置于37℃下30分钟，然后转至4℃孵育不低于12h；

3)弃去酶标板孔内液体，向板孔中加入洗涤液，静置3分钟，重复3～5次；每次洗涤时弃去孔内液体，最后一次洗涤弃去洗涤液后，将残留液体在吸水纸上拍干；

4)用含0.5-4％BSA、2％-8％新牛血清的0.01M pH7.4的磷酸盐缓冲液封闭酶标板；

5)将酶标板置于37℃下1h，孵育后将孔内液体弃去，在吸水纸上拍干；

6)向酶标板板孔加入含5％-20％蔗糖的0.01M pH7.4的磷酸盐缓冲液室温孵育3-5h，弃去孔内液体，自然晾干后，用加入干燥剂的包装袋抽真空密封保存。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含酶标抗体，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的山羊抗猪IgG。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：样品稀释液、洗涤液、阴性对照血清、阳性对照血清、底物显色液A、B和终止液。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照血清为gG蛋白重组抗原免疫猪后，采集含有gG抗体的猪血清。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液和洗涤液中含有ProClin300作为防腐剂。