[发明专利]膜醭毕赤酵母及其在手性合成(R)‑1,3‑丁二醇中的应用

权利要求书

1.一株膜醭毕赤酵母，其特征在于，所述菌株为膜醭毕赤酵母（Pichia membranaefaciens）PGU，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No. 9096，保藏日期：2014年4月28日。

2.权利要求1所述的膜醭毕赤酵母以4-羟基-2-丁酮为底物手性合成(R)-1,3-丁二醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）预培养：膜醭毕赤酵母PGU接入共底物溶液，培养时间为2 h；

2）转化：向步骤1）得到的含有膜醭毕赤酵母PGU的共底物溶液中加入4-羟基-2-丁酮，以供膜醭毕赤酵母PGU进行生物转化，得到所述(R)-1,3-丁二醇。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）所述共底物溶液为在pH值为7.0的0.1 mol/L磷酸钾缓冲溶液中加入共底物得到的溶液，所述共底物为蔗糖、葡萄糖、甘油或乙醇中的一种。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）所述共底物溶液为在含有9 g/L磷酸氢二钾、6 g/L磷酸二氢钾、0.5 g/L硫酸铜、0.2 g/L氯化钴、0.1 g/L钼酸钠、0.1 g/L硫胺素和0.1 g/L生物素的水溶液中加入共底物得到的溶液，所述共底物为蔗糖、葡萄糖、甘油或乙醇中的一种。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述共底物为蔗糖，其在共底物溶液中的浓度为60 ~ 120 g/L。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）中所述膜醭毕赤酵母的接入密度为6 × 10⁶ ~ 16 × 10⁶ /mL。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）和步骤2）的温度为26 ~ 34°C。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）和步骤2）中通气搅拌以保持共底物溶液的溶氧水平高于1 mg/L。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2）中4-羟基-2-丁酮以10 ~ 55 g/L的浓度添加在含膜醭毕赤酵母PGU的共底物溶液中，转化时间为15 ~ 75小时。

10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2）后还包括(R)-1,3-丁二醇的分离和纯化步骤：离心分离步骤2）所得的转化液，收集上清液，先用氯化钠饱和，再用等量的乙酸乙酯萃取3次，减压至绝对压力35 ~ 45 kPa，蒸发萃取相，得到转化产物。