[发明专利]一株血清5型副猪嗜血杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物免疫领域，具体地说，涉及一株血清5型副猪嗜血杆菌及其应用。 

背景技术

副猪嗜血杆菌病又称格拉泽氏病(Glasser’sdisease)，由副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)引起。该病于1910年由德国学者Glasser首先报道，现已在全世界范围内广泛分布。目前，副猪嗜血杆菌感染是引起猪场仔猪高死亡率的主要病因之一。在美国，该病已成为危害保育猪群健康的重要传染病，与蓝耳病(PRRS)、圆环病毒(PCV)并列为第一位，排在流感、链球菌和大肠杆菌病之前。该病目前也给中国猪群带来很大威胁，随着猪繁殖与呼吸综合征(PRRS，蓝耳病)的流行，副猪嗜血杆菌病给猪群造成的损失比以往更为严重，而爆发性的副猪嗜血杆菌病也比以往更为普遍。 

Hps只感染猪，有很强的宿主特异性，可以影响2周龄～4月龄的猪，主要在断奶前后和保育舍阶段发病，常见于5～8周龄，感染高峰通常见于保育期的4～6周，有些可早在保育舍内最初2周时就开始出现，并一直持续到肥育期早期，发病率可达40％，严重时死亡率可达50％。与以往相比，本病的流行特点已经发生改变。以前本病是零星散发发生的，且与断奶猪的应激有关，但目前此病的发病率和死亡率均呈显著上升趋势,呈现地方流行性，而且常与猪的几种重要病原体并发感染，如与猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪圆环病毒引起混合感染。 

Hps是一种细小杆菌，在显微镜下呈多形态，非溶血性，不运动，无芽孢，无鞭毛，革兰氏阴性。新分离的菌株多呈球杆状或双球状， 有时可呈短链状，在陈旧培养物中多呈多形态，有长杆状和丝状。Hps属于需氧或兼性厌氧菌，最适生长温度为35～37℃，pH7.6～7.8，CO₂3％～5％。在适宜培养基上生长的菌落呈圆形，隆起，表面光滑，边缘整齐，灰白色半透明，针尖大小。Hps培养条件严格，生长依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD或V因子)，不需要X因子。在巧克力培养基上生长较差，在加NAD、马血清的M96支原体培养基或加酵母浸出物的PPLO培养基上生长良好。目前副猪嗜血杆菌至少有15种血清型，其中血清1、5、10、12、13、14型毒力最强，2、4、8、15型具有中等毒力，3、6、7、9、11型不能引起临床感染。从世界范围内看，血清4、5、13型最为流行，日本、德国、美国、西班牙、加拿大和中国以血清4型和5型最常见，澳大利亚和丹麦分离的菌株主要为血清5型和13型，但临床分离菌中约20％无法定型。但最新的研究结果表明，危害北美各猪场的Hps流行血清型发生了改变，在美国的猪场中血清5型不再广泛流行，而以血清4型(39％)和不能分型的分离株(27％)最为流行。我国当前Hps流行的优势血清型主要为4、5、12、13型。Hps毒力和致病性可能与细菌毒素有关，但至今这方面的报道很少。副猪嗜血杆菌是否只产生巴氏杆菌科的一些非常重要的毒力因子如荚膜、菌毛、脂多糖、外膜蛋白以及它们与本菌的毒力是否有关，目前还知之甚少。 

我国是猪肉消费大国，猪肉的消费占总体肉食消费的80％以上，生猪价格的波动会严重影响居民消费指数。目前曾严重影响我国养猪业的猪瘟、高致病性蓝耳病、猪圆环病毒病等已经得到有效控制，但以副猪嗜血杆菌病为代表的细菌病对养猪业的危害正日益加重。从而导致大量使用抗生素进行治疗，结果是：一方面导致猪产品抗生素超标，危害人的身体健康，另一方面导致细菌耐药性不断增强，耐药菌株不断出现，尤其是副猪嗜血杆菌，非常容易耐药，导致治疗效果不好，从而养殖户加大抗生素用量，造成恶性循环。国外研究表明，用 同血清型的菌株制成的灭活疫苗能够有效抵抗野毒株的感染，是预防和控制副猪嗜血杆菌病最有效的措施。近年来，国内也开展了灭活疫苗的研究，显示了很好的防治效果。因此，在了解本我国主要流行菌的血清型的基础上，采用灭活疫苗进行接种，可以有效预防本病的发生。血清5型副猪嗜血杆菌致病力较强，在世界范围内流行最广，在我国也流行最广泛，引起的危害也最大。同为5型的不同副猪嗜血杆菌菌株毒力不同，免疫原性也不同，所以，通过动物试验筛选出一株毒力强、免疫原性好的菌株是制备副猪嗜血杆菌灭活疫苗的关键技术。 

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一株毒力强、免疫原性好的血清5型副猪嗜血杆菌及其应用。 

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：