[发明专利]基于山奈酚3-O-β-D-葡萄糖-(2→1)-β-D-葡萄糖苷鉴别蜂花粉的方法

说明书

技术领域

本发明涉及蜂花粉的鉴别方法，具体涉及一种基于山奈酚3-O-β-D-葡萄糖-(2→1)-β-D-葡萄糖苷含量鉴别蜂花粉的方法。 

背景技术

蜂花粉是蜜蜂从蜜源植物的雄蕊中采集的花粉，加上蜜蜂自身的腺上分泌物、唾液和花蜜形成的不规则扁圆形的团状物。 

蜂花粉含有多种氨基酸、维生素、矿物元素、不饱和脂肪酸、有机酸、蛋白质、脂类、碳水化合物，多酚类和黄酮类物质、多糖、酶类、核酸、激素等活性物质，具有丰富的营养价值。 

蜂花粉因其成分多样而富有多种活性功能，不仅对治疗贫血有特殊的疗效，对于治疗前列腺疾病也有较好的疗效；还具有抗癌、抗辐射、降血脂、防治心脑血管疾病的作用；此外，蜂花粉对于治疗习惯性便秘、胃肠病、肝病、神经衰弱均有功效；同时，蜂花粉对保护皮肤和美容有明显的作用，可除去多余的脂肪达到减肥美体的目的，其提取物还具有保湿、抗氧化、调理皮肤和头发的功效(孙丽萍，田文礼，朱晓丽等.蜂花粉功能食品的研究思路.中国养蜂，2006，57(10):39-40)。 

蜂花粉中各成分的含量如下：蛋白质20-25％、碳水化合物40-50％、脂肪5-10％、矿物质2-30％、木质素10-15％、未知物质10-15％，黄酮类物质是蜂花粉中重要的功效组分，也是保健食品中的有效成分。 

目前一些不法商家将价格较低的蜂花粉掺入价格较高的蜂花粉中赚取高额利润，但是由于大多数的蜂花粉颜色，味道非常相近，所 以很难对市场的蜂花粉进行鉴别。通常根据植物来源对蜂花粉进行分类，所以不同蜂花粉之间的营养成分和生物学功能均存在一定差异。 

已有的研究报道中鉴别花粉品种的方法为：感官检验，显微镜镜检，比色法、紫外分光光度法、高效液相色谱-大气压电离质谱法(LC-TSP-MS)、胶束毛细管电泳法(MECC)和高效液相色谱法(HPLC)。(以下内容摘录自蜂花粉中黄酮类化合物的检测及纯化方法的研究，该文献是中国农业科学院孙丽萍撰写的硕士论文，2005年10月公开)其中： 

感官检验主要通过眼看蜂花粉的颜色和品尝味道来鉴别种类，但是很多蜂花粉颜色差异比较小乃至肉眼很难分辨，不同的人观察后也会认为是不同的颜色；一些种类的蜂花粉均具有微甜的味道，很难通过品尝分辨其种类，所以该方法最大的缺点是鉴别能力的准确度低，容易受人为因素的影响； 

在电子显微镜下来源于不同植物的花粉大小和形状存在一定的差异，因此，可以通过显微镜下的轮廓图鉴定植物的种类，但是在显微镜下很多蜂花粉的形态非常接近，这容易造成鉴别方法主观性强，准确性低； 

比色法是在碱性溶液中加Al³⁺与3-羟基黄酮、5-羟基黄酮进行络合反应，利用颜色和含量关系进行比色测定的方法，该法用于组成单一的标准对照物时，结果准确，但当应用于组分复杂的植物试样时，比如花粉黄酮提取液，由于受到花色素、鞣酸及其它酚性成分等多种物质的干扰，而且底液常常出现浑浊现象，因此测定结果明显偏高，而且测定结果重现性不好。 

紫外分光光度法：是利用黄酮类化合物在紫外区有较强吸收，利用适当的对照品进行黄酮的测定。为了消除一些水溶性的强极性物质的干扰，将样品用聚酰胺进行了分离提纯，再采用紫外分光光度法测定，此为聚酰胺-紫外分光光度法。 

高效液相色谱法：一种方法是采用样品直接进样，梯度洗脱，高效液相色谱分析，测定样品所含黄酮苷类成分，但是由于黄酮苷类种类多，不可能一次分离，而且很多都没有标准对照物可对照，很难定量；另一种方法是通过测定水解苷元含量来计算黄酮苷的量，其测定原理是：蜂花粉黄酮主要成分是以黄酮苷形式存在，经酸水解后生成黄酮醇类化合物，其主要是槲皮素、异鼠李素和山奈酚三种成分，，用HPLC分离测定这三种苷元的含量，再用计算方式转换成相应蜂花粉黄酮苷的含量。 

利用薄层色谱法可分离分析蜂花粉中的维生素，由斑点的数目、形状、颜色、荧光及Rf值比较，从而鉴别蜂花粉种类(杨梦兰，李忠奇，王伟等.TLC法鉴别花粉种类，广东公安科技，2000，3：16-19)，但是该方法中使用了大量的具有挥发性的有毒有害试剂，如氯仿，冰醋酸，二氯甲烷和氨水等，而且根据Rf值和颜色鉴别也具有主观性强，准确性低等缺点。