[发明专利]单唾液酸四已糖神经节苷脂GM1原料的制备方法

权利要求书

1.一种单唾液酸四己糖神经节苷脂GM1原料的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

a.取冻存新鲜猪脑，加水浸泡自然解冻，再用水清洗，然后加入猪脑重2-5倍重量的纯化水用胶体磨匀浆10min，将匀浆所得浆液倒入提取罐中加热至80-85℃后保温10-20min，再按猪脑重每1kg加入2-5 ml的比例加入浓度为12mol/L的浓盐酸搅匀、冷却至20-50℃，再以3500-4000r/min的速度离心分离5min，然后去除上层乳浊液，收集沉淀物，即得纯化脑蛋白；

b. 将经上述步骤得到的纯化脑蛋白加入甲醇进行匀浆，再用氢氧化钠调pH值为7-9，然后搅拌，离心过滤，收集上清液，即得醇提液；

c. 将经上述步骤得到的醇提液浓缩，得醇提浓缩液；

d. 将经上述步骤得到的醇提浓缩液，调pH值为2-5，水解，然后离心分离，收集上清液，即得水解液；

e. 将经上述步骤所得水解液连续多次循环超滤，截留分子量为1600道尔顿以上的物质，得GM1的初纯品，再将GM1的初纯品超滤，去除分子量为1500道尔顿以下的物质，即得GM1溶液纯品；

f. 将经上述步骤所得GM1溶液纯品干燥，即得单唾液酸四己糖神经节苷脂GM1原料。

2.根据权利要求1所述单唾液酸四己糖神经节苷脂GM1原料的制备方法，其特征在于：所述b步骤，将经a步骤所得纯化脑蛋白按猪脑重量3-6倍的比例加入浓度为75-95%的甲醇，胶体磨匀浆1次，倒入提取罐中，用6mol/L氢氧化钠调pH值为7-9，加热保温至40-60℃搅拌3-8h，再以3500-4000r/min的速度离心分离5min，弃沉淀，收集上清液，即得醇提液。

3.根据权利要求1所述单唾液酸四己糖神经节苷脂GM1原料的制备方法，其特征在于：所述c步骤，将经b步骤所得醇提液，60-80℃条件下真空减压浓缩至猪脑重量的1/3-1/5，即得醇提浓缩液。

4.根据权利要求1所述单唾液酸四己糖神经节苷脂GM1原料的制备方法，其特征在于：所述d步骤，将经c步骤所得醇提浓缩液，用6mol/L盐酸溶液调pH值为2-5，60-80℃条件下水解3-5h，然后冷却至20-50℃，以3500-4000r/min的速度离心分离5min，弃沉淀，收集上清液，再用6mol/L氢氧化钠溶液调pH值为7-8，即得水解液。

5.根据权利要求1所述单唾液酸四己糖神经节苷脂GM1原料的制备方法，其特征在于：所述e步骤，将d步骤所得水解液置于能截留分子量为1600道尔顿的中空纤维超滤膜内进行连续多次循环超滤，截留分子量为1600道尔顿以上的物质，得GM1的初纯品，再将GM1的初纯品置于能够截留分子量为1500道尔顿的中空纤维超滤膜中超滤，去除分子量为1500道尔顿以下的物质，得GM1溶液纯品。

6.根据权利要求1所述单唾液酸四己糖神经节苷脂GM1原料的制备方法，其特征在于：所述f步骤，将e步骤所得GM1溶液纯品以﹣60℃冷冻干燥或喷雾干燥，即得单唾液酸四己糖神经节苷脂GM1原料。