[发明专利]一种Rh血型DEL型RHD838G>A等位基因及其检测方法

权利要求书

1.一种Rh血型DEL型RHD838G>A等位基因，其特征是：其野生型基因DNA序列如SEQ ID NO：1所示，突变型基因DNA序列如SEQ ID NO：2所示。

2.权利要求1所述Rh血型DEL型RHD838G>A等位基因的检测方法，其特征是：通过基因扩增方法对包含突变基因的目标部位的检测区选择性地进行扩增，由此检测该突变基因的有无；所述检测方法如下：

（1）提取待检样本中DNA；

（2）以该DNA为模板，针对RHD838G>A突变基因附近的编码区设计的PCR引物进行PCR反应，得到PCR反应产物；

（3）测出PCR反应产物的核苷酸序列组成；

（4）将核苷酸序列与RHD野生型基因的序列进行比较，确定是否有838G→A突变。

3.如权利要求2所述Rh血型DEL型RHD838G>A等位基因的检测方法，其特征是具体步骤如下：

（1）引物设计：针对RHD等位基因序列，设计一对特异性寡核苷酸引物序列，其中正向引物为RHD838A-F，其序列如SEQ ID NO：3所示；反向引物为RHD838A-R，其序列如SEQ ID NO：4所示；扩增产物片段长度为163bp；并引入1对内参照引物序列作为DNA样本扩增阳性内参照，正向引物为β-globin-F，其序列如SEQ ID NO：5所示；反向引物为β-globin-R，其序列如SEQ ID NO：6所示，内参照扩增产物片段长度为102bp；

（2）RHD838G>A等位基因增扩：反应体系总体积50μL；其中含PCR 5×缓冲液10μL，DNA模板200ng，1U/μL的 Taq聚合酶1.0μL，MgCl₂终浓度为2.0mmol/L，dNTP终浓度为200nmol/L，特异性正向引物和反向引物的终浓度均为200nmol/L；加消毒双蒸水至反应体系总体积50μL；

将上述反应体系在PCR仪中反应，反应条件：95℃预变性5min，然后依次94℃变性30s，接着62℃退火40s，72℃延伸1min，共35个循环；

（3）RHD838G>A等位基因检测：用琼脂糖凝胶对将步骤（2）所得的增扩产物进行电泳，以检测其是否有目的片段。