[发明专利]泡盛曲霉及其微生物菌剂和应用

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种用于防治黄瓜枯萎病的泡盛曲霉和含有该泡盛曲霉的微生物菌剂，及其在防治黄瓜枯萎病上的应用，属于农业微生物技术领域。 

背景技术

黄瓜枯萎病是一种世界性的土传真菌病害，由半知菌亚门镰孢属尖孢镰刀菌黄瓜专化型（Fusarium oxy sporum f.sp.Cucumerinum Owen）侵染引起，可导致维管束和导管受损，最终造成黄瓜枯萎、萎蔫直至甚至死亡。在许多蔬菜基地，黄瓜枯萎病常年发病率10%-30%，重病年份可达80%-90%，一般减产30%-50%，重者绝收，严重影响了黄瓜的产量和品质。 

目前世界各国对黄瓜枯萎病的防治主要还是采用化学方法，虽然化学方法在一定程度上抑制了枯萎病害发生，但化学药剂负面影响严重，对耕地土壤生态环境破坏极大，长期使用容易导致土壤理化性质发生较大变化，土壤中有益微生物数量显著减少，土壤自身修复能力降低，而且化学药剂残留严重，容易污染周边水源，对农产品及周边的居民身心健康有着很大的威胁，因此世界各国已经禁用或逐渐禁用部分剧毒农药如甲基溴等。开发出高效、无毒、绿色的防治方法受到了越来越多的关注。其中，通过采用安全、高效、环境友好型的生物技术手段，利用拮抗微生物来减少黄瓜枯萎病害发生，被认为是一种具有广阔应用前景的黄瓜枯萎病防治生物技术。该技术通过分离筛选黄瓜枯萎病菌拮抗微生物，制备拮抗微生物菌剂后，施入黄瓜种植土壤中，从而达到抑制黄瓜枯萎病菌生长，防控黄瓜枯萎病发生的目的。但目前可供利用的拮抗微生物种类和数量还相对较少，主要包括木霉属真菌、非致病尖孢镰刀菌、淡紫拟青霉、芽孢杆菌等，因此进一步分离筛选黄瓜枯萎病菌拮抗微生物对于黄瓜枯萎病的防治有着重要的意义。 

发明内容

本发明第一目的在于提供一种用于防治黄瓜枯萎病的泡盛曲霉及其微生物菌剂。 

本发明第二目的在于提供上述微生物菌剂的制备方法。 

本发明第三目的在于提供上述泡盛曲霉菌株及其微生物菌剂在防治黄瓜枯萎病上的应用。 

上述泡盛曲霉（Aspergillus awamori)2-17菌株，于2013 年1 月11日保藏在位于北京市朝阳区北辰西路1 号院3 号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.7127。 

菌株生理特征：上述泡盛曲霉（Aspergillus awamori)2-17在PDA培养基上，在28℃培养4天长满整个9cm培养皿，平坦，质地粉粒状，表面暗褐色，菌落反面呈橙黄色。分生孢子头幼时多呈辐射形；老时疏松或裂成疏松的圆粒状结构；顶囊球形或近球形，淡褐色；分生孢子球形或近球形。 

菌株的鉴定：通过提取上述泡盛曲霉（Aspergillus awamori)2-17菌株的基因组，并用18S通用引物对该菌株进行测定，测定的序列表如SEQ ID NO.1 所示，从18S rDNA基因序列测定结果来看上述菌株可以归为泡盛曲霉。 

利用上述泡盛曲霉（Aspergillus awamori)2-17所制备的微生物菌剂为固体菌剂，由泡盛曲霉株和固体培养基组成；其活性成分为泡盛曲霉（Aspergillus awamori)2-17菌体和它的胞外代谢产物。 

上述微生物菌剂，其内含有的泡盛曲霉（Aspergillus awamori)2-17 的活菌数大于1.0× 10⁸ cfu/g。 

上述微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤： 

（1）菌株活化培养：将分离的泡盛曲霉（Aspergillus awamori)2-17菌株斜面保藏物接种到PDA斜面，置于28℃培养箱中培养4天，然后作为接种物接种PDA平板，接种后将PDA平板置于28℃培养箱中培养4-7天，直至菌丝体上形成孢子；

（2）   制备固体培养基：以麸皮为原料，调节含水率为40%-50%，121℃高压灭菌20min，

将冷却后的麸皮作为泡盛曲霉（Aspergillus awamori)2-17的固体培养基；

（3）   制备固体微生物菌剂：将PDA平板上的泡盛曲霉（Aspergillus awamori)2-17

孢子及菌丝体用无菌水洗涤后作为接种液接种到固体培养基上，于28℃培养7天进行充分的发酵产孢，即得微生物菌剂。

制备上述泡盛曲霉（Aspergillus awamori)2-17及其微生物菌剂所使用PDA平板和PDA斜面均为常规操作方法制备。