[发明专利]一种从斑嗜蓝孢孔菌中提取的抗氧化多糖及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种斑嗜蓝孢孔菌(Fomitiporia punctata（P.Karst.）Murrill，俗名：斑褐孔菌、层卧孔菌)中提取的抗氧化多糖及其制备方法。

背景技术

我国真菌资源丰富，许多真菌作为珍贵的药、食两用菌受到广泛关注。随着对真菌资源开发和研究的不断深入，已从中分离获得了许多活性成分，诸如腺苷、甾醇类、有机酸、萜类等小分子活性物质，除此之外，还有多糖、蛋白、多糖-蛋白复合物等大分子化合物，具有良好的抗病毒、降血糖和增强免疫调节等功能，因此，食、药用真菌作为中草药中的“上上药”，其研究开发存在很大潜力。

斑嗜蓝孢孔菌Fomitiporia punctata（P.Karst.）Murrill，属担子菌纲，非褶菌目，多孔菌科，主要分布在我国的吉林、辽宁、河北、陕西、江苏、浙江、湖北、湖南、福建、广西、江西、安徽、云南等地。一般寄生于栎、槭及其他阔叶树的树皮和腐木上，其子实体多年生，无菌盖，平伏贴生于基物表面可达20cm或更大。菌管多层，干时龟裂，每层厚约2～3mm，并逐年缩小，形成扁半球形的子实体，其总厚度达约15mm，管孔表面初期锈褐色，后期由于被灰色菌丝所充塞而变为淡烟色至棕灰色，子实体的边缘灰黑色，管孔壁厚，完整，管口呈圆形。

目前，虽然市场上已有将斑嗜蓝孢孔菌粗提物作为保健品的商品和治疗冠心病、心绞痛的药品销售，但对斑嗜蓝孢孔菌的药理活性成分的研究报道甚少，缺少相应的理论支撑。

本发明首次从斑嗜蓝孢孔菌子实体中分离纯化得到一种具有抗氧化活性的多糖。

发明内容

本发明目的在于提供斑嗜蓝孢孔菌Fomitiporia punctata（P.Karst.）Murrill中的一种抗氧化多糖及其制备方法，该多糖具有一定的抗小鼠红细胞溶血、清除DPPH、超氧阴离子和羟基自由基的生物活性。

本发明提供的从斑嗜蓝孢孔菌Fomitiporia punctata（P.Karst.）Murrill中提取的抗氧化多糖为淡黄色粉末，分子量为151KDa，由阿拉伯糖、果糖、半乳糖和葡萄糖4种单糖组成，比例为1:6:29:43，同时存在α和β两种构型，易溶于热水，不溶于乙醇、乙醚和丙酮等有机溶剂。

本发明涉及的斑嗜蓝孢孔菌Fomitiporia punctata（P.Karst.）Murrill中的抗氧化多糖是按照如下方法制备的：

（1）将斑嗜蓝孢孔菌Fomitiporia punctata（P.Karst.）Murrill子实体研成粉末，80～100℃热水浸提3～5h，过滤所得滤渣再次浸提，合并滤液，即得斑嗜蓝孢孔菌Fomitiporia punctata（P.Karst.）Murrill子实体粗提液；

（2）斑嗜蓝孢孔菌Fomitiporia punctata（P.Karst.）Murrill子实体粗提液经旋转蒸发浓缩后，加入3～5倍体积无水乙醇，边加边剧烈搅拌，产生沉淀。于2～6℃放置过夜，10000～20000rpm离心20～30min，收集沉淀，依次用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤沉淀数次，即得斑嗜蓝孢孔菌Fomitiporia punctata（P.Karst.）Murrill粗提物；

（3）将（2）步中得到的斑嗜蓝孢孔菌Fomitiporia punctata（P.Karst.）Murrill粗提物用蒸馏水复溶，置于分液漏斗中，用Sevage法除蛋白，然后装入分子截留量为3000～10000Da的透析袋中，在2～6℃，足量蒸馏水中透析，经冷冻干燥，即得斑嗜蓝孢孔菌Fomitiporia punctata（P.Karst.）Murrill多糖粗粉；

（4）将（3）步中得到的斑嗜蓝孢孔菌Fomitiporia punctata（P.Karst.）Murrill多糖粗粉溶解于10～100mM Tris-Hcl(pH7.4)溶液中，上样于DEAE-Cellulose阴离子交换柱，用0～2mol/L NaCl溶液连续梯度洗脱，收集洗脱峰；

（5）将洗脱峰上样于Sephadex G-75分子筛，用蒸馏水洗脱，获得抗氧化多糖。

本发明中斑嗜蓝孢孔菌Fomitiporia punctata（P.Karst.）Murrill抗氧化多糖采用HPLC-ELSD进行纯度和分子量的检测，证明其是分子量为151KDa的纯品。