[发明专利]一种蜡状芽孢杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，更具体的说是涉及一种蜡状芽孢杆菌及其应用。

背景技术

香草兰（Vanilla planifolia Andrews）是兰科热带藤本香料植物，有“天然食品香料之王”的美誉。其鲜豆荚经过生香加工后含有250多种芳香成分，香气独特，被广泛用于调制各种高级香烟、名酒、茶叶，是各类高档食品和饮料的配香原料，在国际市场上供不应求。

香草兰为多年生作物，随着种植年限的增加，土壤微生物区系失调，土传病原菌根茎腐病致病菌-尖孢镰刀菌的数量明显增加，土壤微生物多样性趋于简单，香草兰长势弱，出现连作生物障碍问题，严重制约了香草兰种植业的可持续发展。为降低病原菌数量，生产中大量使用农药，导致生产成本增加、农民负担加重，豆荚品质下降，生态环境严重污染。目前，投产期香草兰种植园土传致病菌增加，有益细菌减少，土壤微生物区系失衡已经成为制约香草兰规模化种植的主要因素，也是亟待解决的关键问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种蜡状芽孢杆菌，使得该菌株对尖孢镰刀菌具有明显抑制作用，且能够在土壤中稳定定殖。

此外，本发明的另一个发明目的是所述蜡状芽孢杆菌微生物肥料能够促进香草兰的生长。

为实现上述目的，本发明提供一种从20年园龄香草兰种植园中长势较好的根际土壤中分离得到的菌株，命名为菌株F-6，筛选分离方法如下：

选择20年园龄香草兰种植园中长势较好的根际土壤，样品带回实验室稀释涂布、培养。挑选在血琼脂培养基上有明显溶血圈的菌株（表明其可产生抗真菌脂肽类活性物质），再通过平板对峙试验复筛出对香草兰根茎腐病致病菌-尖孢镰刀菌有显著抑制作用的菌株F-6。通过16S rDNA方法（其16S rDNA如SEQ ID NO:1所示）鉴定菌种为蜡状芽孢杆菌。菌株F-6可产生抗真菌脂肽类物质，在以麦芽糖、蛋白胨为唯一碳、氮源的条件下生长良好。

本发明所述蜡状芽孢杆菌已于2013年8月3日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.7979。

本发明所述蜡状芽孢杆菌能够显著抑制尖孢镰刀菌，同时，以10⁷cfu/g数量施用本发明所述蜡状芽孢杆菌4个月后，其在土壤中的数量仍保持在10⁵cfu/g以上，充分表明本发明所述蜡状芽孢杆菌可以稳定定殖在土壤中，改善土壤微生物环境，消除连作生物障碍。

因此，本发明还提供所述蜡状芽孢杆菌在防治尖孢镰刀菌中的应用以及在制备防治尖孢镰刀菌的产品中的应用，其中，所述产品优选为生防制剂或微生物肥料。

此外，本发明还提供了一种生防制剂及其制备方法，以及一种微生物肥料及其制备方法。

当本发明所述蜡状芽孢杆菌应用到生防制剂的制备中时，所述生防制剂包括保藏编号为CGMCC No.7979的蜡状芽孢杆菌以及生防制剂上可接受的助剂。所述生防制剂上可接受的助剂可以为本领域常用的物质，如载体油、增活剂以及紫外保护剂等。

所述生防制剂的制备方法为，将保藏编号为CGMCC No.7979的蜡状芽孢杆菌接种于pH值为6-8的NA液体培养基中振荡培养，离心菌体，用无菌水重悬，再离心，用等体积的无菌水悬浮后添加生防制剂可接受的助剂即得。其中，作为优选，所述培养条件为28℃-35℃，振荡速度为160-220转/min，培养时间为24h-48h，最优选为36h。作为优选，所述NA液体培养基配方为：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，余量为水。所述生防制剂上可接受的助剂可以为本领域常用的物质，如载体油、增活剂以及紫外保护剂等。

当本发明所述蜡状芽孢杆菌应用到微生物肥料的制备中时，所述微生物肥料，由保藏编号为CGMCC No.7979的蜡状芽孢杆菌以及牲畜家禽粪便经固体发酵获得。作为优选，所述牲畜家禽粪便为牛粪、猪粪、羊粪、鸡粪、鸭粪、鹅粪或它们的任意种混合物，更优选的，所述牲畜家禽粪便为腐熟后的牛粪、猪粪、羊粪、鸡粪、鸭粪、鹅粪或它们的任意种混合物。最优选的，所述腐熟的各牲畜家禽粪便中，有机质质量比含量≥35%，有机氮质量比含量为1.0%-2.0%，含水量质量比为25%-30%。

所述微生物肥料制备方法包括以下步骤：