[发明专利]一种总黄酮和绿原酸含量的同时检测方法

说明书

技术领域

本发明属于分光光度计检测技术，涉及一种采用扣除干扰的紫外可见分光光度计检测方法，此法同时测定样品中两类主要化合物的含量；具体是一种同时分析总黄酮和绿原酸含量的简便方法，特别是一种同时分析金银花及其提取液、提纯物或者其它类似植物草药中的总黄酮与绿原酸含量的方法。

背景技术

绿原酸和黄酮在植物中分布很广，其中黄酮一般以几种结构相似或相近的成分共存于植物中，其总量称为总黄酮含量。绿原酸具有利胆、抗菌、抗病毒、降压、消炎及升高白细胞、止血、缩短血凝和出血时间及兴奋中枢神经系统生理功能，近年来研究发现绿原酸还具有抗HIV病毒和抗肿瘤等作用。黄酮类化合物具有软化血管，降血糖，降低心肌耗氧量，抗心律不齐，降血脂等作用，同时还具有抗衰老和增加机体免疫力功能。因为两者具有独特的生物活性，在医药、食品和日用化工等领域有着越来越广泛的应用前景。

金银花是我国民间一种常用的中草药，其中同时含有黄酮类化合物和绿原酸等生物活性成分，对金银花及其提取液、提纯物中总黄酮与绿原酸含量的准确分析一直没有得到很好的解决。分析绿原酸和总黄酮含量的方法较多，应用最多的是紫外分光光度法，当用传统的NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH显色方法来测定金银花及其提取和提纯产品中的黄酮含量时，因为在波长510nm处绿原酸等多酚类物质也有显色红移作用(见附图1)，分析误差很大。用直接法测定总黄酮含量时，一般选择波长368nm处最大吸收峰进行分析，但因为绿原酸在波长368nm处有一定的吸光作用(见附图2)，测定结果明显偏高。而对于绿原酸的测定，传统采用在330nm波长处的直接法测定，从附图2可知在330nm波长处芦丁对照品的吸光值较高，结果使得绿原酸的含量严重偏大。

综上所述，金银花中同时含有绿原酸和黄酮，由于两者之间互相干扰，使现有的紫外分光光度法的分析结果误差大。

发明内容

本发明提供一种总黄酮和绿原酸含量的同时检测方法，目的在于解决目前分析误差大，分析过程复杂，两类化合物不能同时检测等问题，实现对黄酮与绿原酸含量进行准确、快捷分析。

本发明提供的一种总黄酮和绿原酸含量的同时检测方法，该方法包括下述步骤：

第1步采用与制作标准曲线相同的方式对待测样品进行氯化钴显色处理；

第2步测定经氯化钴显色反应后的待测样品溶液分别在256nm、330nm波长处的吸光度I₂₅₆、I₃₃₀；

第3步计算样品溶液中绿原酸在330nm波长处已扣除黄酮干扰的吸光度以及黄酮在256nm波长处已扣除绿原酸干扰的吸光度即：

I330L=AA-BI330-A×BA-BI256,I256R=AA-BI256-1A-BI330]]>

其中，A为同一浓度的标准溶液在256nm和330nm波长处绿原酸吸光度的比值关系，B为同一浓度的标准溶液在256nm和330nm波长处芦丁吸光度的比值关系；

第4步利用绿原酸和芦丁对照品的标准曲线，分别计算得到绿原酸和黄酮的含量。