[发明专利]一种无添加有机溶剂分离提纯聚谷氨酸的方法

权利要求书

1.一种无添加有机溶剂分离提纯聚谷氨酸的方法，包括如下步骤：

发酵液制备：

将编号CGMCC3336的地衣芽孢杆菌发酵培养，得发酵液；

发酵液提取

（1）除菌体

将发酵液PH调至4.5～5.5，降低粘度，硅藻土和红土按2：1比例混合，加入量为发酵液的2%-3%，上述为质量体积百分比；800目滤布，板框过滤除菌体，压力为0.22MPa；

（2）除杂蛋白及大分子活性有机物

上述去除菌体的发酵液调PH6.5～7.5，加热升温至90℃保温20min,除去热变形蛋白，冷却至室温，过0.45um中空纤维膜进行超滤，除掉80%以上杂蛋白；

（3）脱色

上述处理过后发酵液加入活性炭进行常温慢速搅拌脱色，抽滤，至液体基本澄清无色，得发酵液；

（4）除小分子氨基酸、离子杂质

上述发酵液稀释后过纳滤膜，再重复此过程，经检测，能去除大部分氨基酸及盐离子；

（5）超滤-浓缩-超滤提纯

采用10kDa和100kDa超滤膜对经上述处理的清液进行加压循环超滤-稀释-超滤-浓缩步骤，最终得到杂质很少的γ-PGA浓溶液，将上述溶液真空冷冻干燥，得到精制白色γ-PGA。

2.根据权利要求1所述无添加有机溶剂分离提纯聚谷氨酸的方法，包括如下步骤：

菌种活化：

将编号CGMCC3336的地衣芽孢杆菌在固体培养基斜面上于37℃培养16个小时，制备成熟的斜面种子；

种子培养：

将活化后的斜面种子接入一环至50ml液体种子培养基的500ml三角瓶中，37℃，220rpm，培养16个小时到对数生长期；

发酵培养：

将种子培养液接入发酵培养液中，接种量为10%，220rpm下培养72h；

发酵液提取：

（1）除菌体

将发酵液PH调至4.5～5.5，硅藻土和红土按2：1比例混合，加入量为发酵液的2%-3%，上述为质量体积百分比；800目滤布，板框过滤除菌体，压力为0.22MPa，流速20～30ml/min；

（2）除杂蛋白及大分子活性有机物

上述去除菌体的发酵液用氢氧化钠调PH6.5～7.5，加热升温至90℃保温20min,除去热变形蛋白，冷却至室温，过0.45um中空纤维膜进行超滤，除掉80%以上杂蛋白；

（3）脱色

上述处理过后发酵液加入1%～1.5%活性炭进行常温慢速搅拌脱色90min，抽滤，得发酵液；

（4）除小分子氨基酸、离子杂质

上述发酵液稀释2～3倍后过纳滤膜，再重复此过程，经检测，能去除大部分氨基酸及盐离子；

（5）超滤-浓缩-超滤提纯

采用10kDa和100kDa超滤膜对经上述处理的清液进行加压循环超滤-稀释-超滤-浓缩步骤，最终得到杂质很少的γ-PGA浓溶液，将上述溶液真空冷冻干燥，得到精制白色γ-PGA，纯度在90%以上。