[发明专利]一种从细叶杜香中提取鉴定七叶树素、秦皮苷、秦皮素和白藜芦醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及细叶杜香中抗氧化活性成分的提取鉴定方法，特别涉及一种从细叶杜香中提取鉴定七叶树素、秦皮苷、秦皮素和白藜芦醇的方法，属于生物技术领域。

背景技术

杜香（Ledum palustre L）是分布我国大小兴安岭、长白山地区的主要天然植物之一，是杜鹃花科杜香属小灌木，分为细叶杜香（Ledum palustre L.var.Angustum E.Busch）和宽叶杜香（Ledum palustre L.var.dilatatum Wahl），资源十分丰富。杜香广泛应用于中国传统医学，其功能包括：解毒、戒毒、抗菌、抗癌和抗糖尿病等，常用于治疗风湿病、关节病、咳嗽、感冒等疾病。现代研究表明，杜香属植物含有丰富的挥发油、萜烯类、黄酮类等多种生物活性化合物，广东药学院的黄莹、张德志等分离鉴定了七叶内酯、对羟基苯甲酸、槲皮素、金丝桃苷等化学成分，中国沈阳药科大学的左文健、王金辉等从杜香中鉴定出蒲公英萜醇、熊果酸、熊果醇、角鲨烯、大戟醇乙酰酯、槲皮素、山奈酚、棉花皮素、正十一烷、正庚烷等多种化学成分，东北林业大学的赵敏等从杜香中鉴定出32种挥发性成分，相对于众多的杜香中的各种化学成分分析研究，对杜香的抗氧化活性成分的分离鉴定以及应用方面还处于初期探索阶段，仅有中国齐齐哈尔大学的郑永杰、裴世春等少数研究人员发表论文分析鉴定了杜香中的抗氧化活性成分，并利用核磁及质谱等技术确证了杜香中含有秦皮素、染料木苷等抗氧化活性成分，其研究虽然在抗氧化活性成分的分离鉴定过程中采用了On-line HPLC-ABTS+在线系统，但是抗氧化成分的提取方法采用的是传统的溶剂萃取法，不仅提取过程复杂繁琐，且有效成分提取效率不高，无法鉴定出更多的抗氧化活性成分。

目前，抗氧化活性成分的提取鉴定方法主要分三个步骤，一是抗氧化活性成分的提取分离，二是抗氧化活性成分的活性分析，三是抗氧化活性成分的结构鉴定。抗氧化活性成分的提取分离通常包括各种溶剂萃取法、超临界流体萃取法以及结合微波、色谱柱等各种辅助工具进行的提取、分离、纯化方法。抗氧化活性成分的活性鉴定主要是采用体外或体内抗氧化活性的测定的方法。成分的结构鉴定主要是采用核磁、各种色谱技术进行。

传统的抗氧化活性成分的提取鉴定不仅分析时间长，而且操作过程繁琐，特别是不利于微量抗氧化成分的提取鉴定。

现代技术中，有两项技术有利于抗氧化成分的快速提取鉴定，一是高压溶液提取法（PLE，Pressure Liquid Extract)，PLE是一种非常先进的提取方法。原理是提取溶液在高温高压下对样品进行提取，高温帮助液体更好的进入提取物里，减小提取溶液的粘性，提高扩散率，高压则能够帮助当液体超过沸点时保持液体状态。PLE与传统提取方法比较有着显著的优点，包括：减少提取时间、减少提取溶液的使用量、减少对环境污染、并且提高提取率，目前在化合物提取过程中已有应用，包括发明专利号为CN201310055337.8的一种利用高压溶剂提取橘皮中有效成分的方法及装置等；二是On-line HPLC-DPPH⁺在线鉴定抗氧化组分的方法，该方法具有简便快速的特点，专利号为CN102879499A和CN102879500A的专利公开了一种DPPH-HPLC法检测白刺果汁中抗氧化成分的方法和一种DPPH-HPLC法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，该方法主要是利用了DPPH作为检测试剂。

杜香中含有丰富的抗氧化活性成分，在活性成分的提取过成中需要对其提取过程进行有效控制，特别是需要一种多种成分同时进行提取鉴定的简便有效的方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种从细叶杜香里同时提取鉴定抗氧化活性成分七叶树素、秦皮苷、秦皮素和白藜芦醇的方法。

本发明目的通过以下技术方案予以实现，包括如下步骤：

（1）原料选取和预处理：取大兴安岭细叶杜香的嫩枝为原料，经过室温阴干后制成长度为0.5-1.0cm的前处理样品。

（2）加压溶液提取技术提取粗提物：取预处理样品1-2克与双倍重量的海沙混合填装于加速溶剂萃取管（ASE）中后放入密闭避光的提取箱中，在提取温度115℃，提取压力1500psi的条件下，用加速溶剂萃取管容积的60%-70%的体积分数为65%的甲醇静止提取20-30min后收集溶剂，用加速溶剂萃取管容积的30%-40%的体积分数为65%的甲醇溶液对加速溶剂萃取管进行冲洗，用氮气将提取溶液全部冲出后收集所有提取溶液，利用旋转蒸发仪在45-50℃下将提取液制成浸膏粗提物。