[发明专利]一种杯珊瑚菌菌丝多糖的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及真菌多糖技术领域，尤其涉及一种杯珊瑚菌菌丝多糖的提取方法。 

背景技术

陇南康县地处西秦岭南侧陇南山中，最高海拔2483m，最低海拔560m，垂直高差较大，具有明显的立体气候特点。复杂的地形、气候环境，造就了该地区亚热带向暖温带过渡气候，温和湿润，雨量充沛，自然资源十分丰富，拥有高等植物172科1000余种，活立木蓄积量800多万立方米，森林覆盖率高达60%以上，国家和省列珍贵树种28种，天麻、杜仲等野生药材576种，各种菌类96种，尤其是大型真菌中的珊瑚菌类。杯珊瑚菌，别名杯冠瑚菌，属非褶菌目、珊瑚菌科、杯珊瑚菌属，近白色或淡黄色、浅粉红色，柄纤细，顶端杯状。在我国主要分布于吉林、河北、河南、湖南、福建、陕西、四川、甘肃等省。杯珊瑚菌是我国珍贵的野生食用菌资源，具有很高的营养和药用价值。杯珊瑚菌多糖具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老、增强免疫功能等多种生理活性。目前对杯珊瑚菌多糖的提取研究领域基本空白。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种操作简单、成本低、多糖得率高的杯珊瑚菌菌丝多糖的提取方法。 

为解决上述问题，本发明所述的一种杯珊瑚菌菌丝多糖的提取方法，包括以下步骤： 

⑴制备马铃薯葡萄糖斜面培养基：将马铃薯洗净去皮切碎，按其质量的4~6倍加水煮沸25~35min后用纱布过滤，得到滤液A，该滤液A补足至1.0L依次加入5~10g葡萄糖和5~10g琼脂，使其pH值为6.0~8.0，在90~100℃温度下充分加热溶解后分装，在压强为1.05Kg/cm²、温度为121℃的条件下灭菌20min即得；

⑵制备种子培养基：将马铃薯洗净去皮切碎，按其质量的4~6倍加水煮沸25~35min后用纱布过滤，得到滤液B，该滤液B补足至1.0L加入5~10g葡萄糖，使其pH值为6.0~8.0，在90~100℃温度下充分加热溶解后分装，在压强为1.05Kg/cm²、温度为121℃的条件下灭菌20min即得；

⑶制备发酵培养基：将马铃薯洗净去皮切碎，按其质量的4~6倍加水煮沸25~35min后用纱布过滤，得到滤液C，该滤液C补足至1.0L加入5~10g葡萄糖，使其pH值为6.0~8.0，在90~100℃温度下充分加热溶解后分装，在压强为1.05Kg/cm²、温度为121℃的条件下灭菌20min即得；

⑷真菌的发酵培养：接一环杯珊瑚菌菌丝至所述马铃薯葡萄糖斜面培养基上，于28℃恒温培养4~10天后，置于4℃冰箱中，得到活化培养后的菌丝体；

⑸接一环所述活化培养后的菌丝体至装有10mL所述种子培养基的试管中，并置于恒温振荡器上，在28℃条件下以100~200 r/min的速率进行振荡培养4~10天，制得pH值为5.0~7.0的菌种种子液；

⑹将所述菌种种子液按5~20%的接种量接种至含有所述发酵培养基的摇瓶中，并置于恒温振荡器上，在28℃条件下以100~200 r/min的速率进行振荡培养4~10天，即得发酵液；所述发酵液在高速冷冻离心机中于5000r/min离心20min，得到菌丝体；所述菌丝体用蒸馏水洗涤后在真空干燥箱于60℃下烘干至恒重后磨成粉，得到菌丝体干粉末；所述发酵培养基在所述摇瓶中的装瓶量为10~30%；

⑺在所述菌丝体干粉末中按1 g：10 mL ~30mL的料液比加入去离子水，在功率为100~300W的条件下超声提取10~30 min后，在温度为80~95℃的条件下浸提次数1~3次，每次1~3h，合并提取液，得到多糖浸提液；

⑻将所述多糖浸提液在高速冷冻离心机中于4000r/min离心10~20min过滤后，得到上清液A，该上清液A在温度为60℃、真空度为0.06~0.08MPa的条件下浓缩至原上清液A体积的1/5~1/3，得到多糖浓缩液；

⑼在所述多糖浓缩液中按其体积的1/4加入Sevag试剂，充分混合搅拌20min，再用高速冷冻离心机以5000 r/min离心20 min除掉变性蛋白质，弃去水与有机相间的蛋白变性层，收集上清液B，反复多次直到所述上清液B与有机相中间有清晰的分界面为止，视为蛋白质除尽，即得多糖提取液；

⑽将50~100 mL所述多糖提取液以2~5 mL/min的流速通过苯乙烯系大孔弱碱性阴树脂离子交换树脂床进行脱色，得到多糖流出液；

⑾在所述多糖流出液中按其体积的2~4倍加入质量浓度为95%的乙醇，在4℃下静置24h，得到沉淀物A；