[发明专利]棉酚的新应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及棉酚的新应用，尤其涉及棉酚作为APE1抑制剂的应用及其在制备治疗癌症的辅助剂或化疗增敏剂中的应用。 

背景技术

随着生活水平的提高及环境污染的加重，恶性肿瘤的发病率有逐年上升的趋势，目前已被临床界定为常见病、多发病，严重威胁了人类的健康。脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子（Apurinic aprimidinic endonuclease1/Redox factor-1，APE1/Ref-1）是生物大分子功能复合体的范例，一方面APE1具有DNA修复活性，它作为AP核酸内切酶，是DNA碱基切除修复（base excision repair，BER）途径的主要限速酶之一；另一方面APE1还可通过其独有的氧化还原功能调控关键转录因子的DNA结合活性，所述关键转录因子包括NF-κB，AP-1，HIF-1α，Egr-1，p53，PEBP2，Myb及Pax5、Pax8等。这些转录因子的激活需要其DNA结合结构域—关键半胱氨酸残基维持还原状态，而APE1则通过改变这些活性位点的氧化还原状态，发挥“基因开关”的作用。因此，APE1是连接DNA碱基切除修复、转录因子的氧化还原调控和氧化应激等重要生物学效应的桥梁，对细胞的存活有着至关重要的意义。 

目前，研究发现APE1在多种肿瘤中的表达均高于正常组织，利用免疫组织化学和Western blot等方法进行定量研究，结果表明在多种恶性肿瘤组织中APE1的表达水平明显升高（其高表达率在72%～90%），其中恶性肿瘤组织包括肝癌、骨肉瘤、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、大肠癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、脑胶质瘤和宫颈癌等。经证实，APE1的高表达可能是肿瘤发生的早期事件，其表达强度的改变与肿瘤的发生和进展密切相关，而且，APE1高表达与骨肉瘤、脑胶质瘤和非小细胞肺癌患者预后不良密切相关。此外，越来越多的研究结果表明用siRNA敲除肿瘤细胞内源性的APE1能增加细胞对DNA损伤剂的敏感性，所述DNA损伤剂包括甲磺酸甲酯（MMS）、替莫唑胺（TMZ）、依托泊苷、博来霉素、顺铂及电离辐射。相反，肿瘤细胞内过表达APE1则可促进肿瘤细胞对放化疗的抵抗。新近有研究显示APE1在乳腺癌干细胞中高表达， 可能与肿瘤放化疗耐药和干细胞的生物学功能密切相关，也显示APE1是肿瘤治疗的良好靶标。以上研究充分说明，APE1是肿瘤治疗潜在重要靶点之一。 

大量植物提取物和天然产物及其衍生物中存在大量具有清热解毒和抗氧化的成分，采用生物传感器测定和虚拟分子对接的方法发现，中药中确实存在一些与APE1氧化还原功能域药物活性位点具有较强亲和力的组分。这也可能是很多中药和保健食物发挥抗癌效用的重要原因。因此，从天然产物中寻取APE1氧化还原功能的抑制剂，逐渐成为抗癌手段的一个新的重要途径。 

棉酚（Gossypol）是锦葵科植物草棉、树棉或陆地棉成熟种子、根皮中提取的一种多元酚类物质，其结构如式I。棉酚作为一种公认的男性节育药，已受到国内外学者广泛关注。然而棉酚可能是一种颇有前途的抗癌药物被越来越多的学者所认识。自60年代初至今已有不少有关棉酚抗肿瘤作用的报道、其中涉及棉酚抗肿瘤机制以及体外培养的肿瘤细胞、人肿瘤的动物模型和临床应用等研究。但是至今尚未见到有关棉酚可抑制APE1氧化还原和DNA损伤修复功能的报道。 

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供棉酚的新应用，即棉酚在制备APE1氧化还原功能抑制剂或APE1的DNA损伤修复功能抑制剂中的应用。 

Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。本发明首先通过CCK-8试剂盒考察棉酚对人宫颈癌细胞（Hela）、人肝细胞癌 （HepG2）细胞增殖的影响。结果显示，在Hela、HepG2试验中，棉酚对肿瘤细胞的杀伤效应具有时间和剂量依赖性，其IC₅₀均在50μM以下，表明棉酚对肿瘤细胞有较强的杀伤效应。