[发明专利]一种接种鸡胚用病毒稀释液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种接种鸡胚用病毒稀释液及其制备方法。

背景技术

目前病毒的培养有动物接种、组织培养和鸡胚培养3种方法。其中鸡胚培养是病毒培养中最常用的方法之一。鸡胚是正在发育中的机体，多种动物病毒能在鸡胚中增殖和传代。鸡胚的优点在于胚胎的组织分化程度低，而且可以选择不同的日龄和接种途径，病毒在鸡胚中易于增殖，部分病毒感染鸡胚以后可以产生豆瓣，引起充血、出血、坏死灶和死亡等特异性的感染指征。感染病毒的鸡胚组织和液体中含有大量病毒，容易采集和处理，而且来源充足，设备和操作简便易行。

当前国内生产的新城疫疫苗基本都是采用鸡胚接种病毒后进行增殖，收获尿囊液制备而成。研究表明，鸡胚日龄和种毒接种量与收获时的鸡胚尿囊液量呈负相关。即随着接种鸡胚日龄的增加和种毒接种量的提高，收获的鸡胚尿囊液会减少。通常选用10日龄鸡胚进行新城疫病毒接种培养繁殖，一般在培养96～120小时收获鸡胚液，即14～15日龄，此时日龄偏大，尿囊液含量不高（鸡胚发育的13～14日龄尿囊液含量最高）；若提高尿囊液含量必须提前收获，但此时病毒含量并未达到峰值，造成毒价降低同样得不偿失。另外日龄越低鸡胚的组织分化程度越低，越有利于病毒的增殖，但按通常手段采用低日龄（如9日龄）鸡胚进行病毒的接种培养，因鸡胚抵抗力差，过早死亡等导致鸡胚尿囊液中病毒毒价较低，尿囊液含量也较低。

葡萄糖在生物学领域具有重要地位，是活细胞的能量来源和新陈代谢中间产物。是一种能直接吸收利用，补充热能的碳水化合物，是机体所需能量的主要来源。能促进肝脏的解毒功能，对肝脏有保护作用。是生物体内最为常见的能源物资。

氨基酸，是含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。维生素又名维他命，通俗来讲，即维持生命的物质，是维持机体生命活动必须的一类有机物质，也是保持机体健康的重要活性物质。维生素是机体代谢中必不可少的有机化合物。机体犹如一座极为复杂的化工厂，不断地进行着各种生化反应。其反应与酶的催化作用有密切关系。酶要产生活性，必须有辅酶参加。已知许多维生素是酶的辅酶或者是辅酶的组成分子。因此，维生素是维持和调节机体正常代谢的重要物质。在体内硒和维生素E协同，能够保护细胞膜，防止不饱和脂肪酸的氧化。

多糖是中药活性成分之一，大量研究表明，多糖及糖复合物在生物体内不仅是作为能量资源和构成材料，更重要的是它存在于一切细胞膜结构中，参与生命现象中细胞的各种活动。多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分，具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的能力。

本发明基于上述技术背景，提出一种接种鸡胚用病毒稀释液，具体是一种特别适用于鸡新城疫病毒的稀释液，解决了新城疫病毒低日龄鸡胚的培养难题，提高了病毒液收获量和病毒滴度。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种接种鸡胚用病毒稀释液及其制备方法的技术方案，通过该病毒稀释液稀释病毒后接种鸡胚，可同时提高病毒滴度和收获病毒液量。

所述的一种接种鸡胚用病毒稀释液，其特征在于每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分：葡萄糖10～50g、氨基酸组合3～5g、维生素组合6～10g、亚硒酸钠0～10mg和复方中药多糖30～100g；

所述的氨基酸组合包括L-脯氨酸、甘氨酸、酪氨酸、胱氨酸和丝氨酸；

所述的维生素组合包括维生素B1、维生素C和维生素E；

所述的复方中药多糖由怀牛膝、虫草、茯苓、枸杞和丹参提取得到。

所述的一种接种鸡胚用病毒稀释液，其特征在于该稀释液的pH为6.6～7。

所述的一种接种鸡胚用病毒稀释液，其特征在于所述的磷酸缓冲液由氯化钠6～10g，氯化钾0.05～0.5g，磷酸氢二钠1～1.2g，磷酸二氢钾0.05～0.5g，氯化钙0.05～0.2g，含6个结晶水的氯化镁0.05～0.2g溶于1000ml双蒸水中得到。

所述的一种接种鸡胚用病毒稀释液，其特征在于每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分：葡萄糖15～45g、氨基酸组合3.5～4.5g、维生素组合7～9g、亚硒酸钠2～8mg和复方中药多糖40～80g。

所述的一种接种鸡胚用病毒稀释液，其特征在于所述的氨基酸组合中含有：L-脯氨酸10～30%、甘氨酸5～15%、酪氨酸10～30%、胱氨酸20～40%和丝氨酸10～30%。