[发明专利]一株荧光假单胞菌及其应用

说明书

技术领域

本发明属于解磷微生物肥料领域。具体而言，本发明涉及一株能够高效解磷细菌荧光假单胞菌及其用途，以及采用该荧光假单胞菌制备的生物磷肥。

背景技术

磷是植物细胞中遗传物质DNA和能量物质ATP的基本构成元素，在植物的整个生命过程中起着重要的作用，磷是植物生长发育的必需元素之一，高能磷酸键是能量的载体，植物的光合作用和体内的生化过程都必须有磷参加。磷既是农业生产的重要物质保证，又是不可再生的矿质资源。我国耕地土壤中全磷的质量分数一般在0.2～1.1g/kg（土）之间变动，许多土壤磷素供应不足，因此利用解磷微生物定向地调节土壤磷素状况和提高磷肥利用率是达到作物高产、品质优良的重要途径之一。

荧光假单胞菌是革兰氏阴性好氧细菌类群，它包含了极其多样化的一群微生物。该属中有许多是致病菌，能引起人、动物及植物发病。但也有相当一部分属于有益菌，尤其在植物根围部分所筛选到的具有生防活性的细菌绝大部分属于假单胞菌属。这类细菌营养需求简单，在自然界中分布广泛。荧光假单胞菌属于假单胞菌属的rRNA同源组I，杆状，具有极生鞭毛、化能异养型。与该属下其它种类的典型区别在于能产生水溶性的黄绿荧光色素。

细菌溶磷机理非常复杂，有些细菌溶磷主要是质子起作用，有些主要是有机酸起作用，而有些菌株则两种机制都存在，还有些菌株由于生长过程中产生其它的螯合物质，从而导致磷矿粉的溶解。充分利用解磷微生物这一特性，不仅可以利用固定态、吸附态的磷，有效缓解土壤中缺磷的现状，而且对提高磷肥利用率，减少磷肥的使用所造成的环境污染，甚至对提高作物产量及其品质，都具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于高效解磷细菌——荧光假单胞菌菌株pt4。本发明的荧光假单胞菌菌株具有生长速度快、解磷能力强、抗逆性强，在植物根际能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。

本发明的另一个目的是提供一种采用该新的荧光假单胞菌制备的能够高效解磷的微生物菌剂。

本发明所提供的菌株为荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）pt4，是从湖北省洪湖市土壤中分离获得的，已于2013年5月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），保藏号为CGMCC No.7597。其具有以下生物学特性：在NA培养基上，在30℃培养时，菌落较规则，边缘较整齐，表面光滑较湿润，不凸起，半透明，颜色为淡黄色。菌体呈直杆状，（0.5～1.0）μm×（1.5～5.0）μm，革兰氏染色阴性，产生荧光色素、不产生类胡萝卜素和脓青素；可以利用柠檬酸盐，对青霉素有抗性；氧化酶、接触酶和精氨酸双水解酶阳性，明胶液化、吲哚反应阳性，水解淀粉、反硝化、V-P反应阴性。

本发明荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescensis）菌株pt4的培养方法或繁殖方法包括：

（1）普通培养保存采用NA培养基（Nutrient agar），配方：0.5%蛋白胨，0.3%牛肉膏，0.5%NaCl，1.5%琼脂，蒸馏水，pH调至7.0。

（2）实验室液体培养采用NA培养基：0.5%蛋白胨，0.3%牛肉膏，0.5%NaCl，蒸馏水，pH调至7.0。

（3）种子罐液体发酵培养基，配方：玉米粉15g，葡萄糖4g，豆饼粉21g，鱼粉4g，CaCO₃9g，(NH₄)₂SO₄1.5g，K₂HPO₄0.5g，MgSO₄·7H₂O0.1g，NaCl0.1g，水1000mL，pH调至7.5。

（4）大量发酵培养基同种子罐液体发酵培养基。

本发明还提供一种能够高效解磷的微生物菌剂，所述微生物菌剂含有所述的荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescensis）菌株pt4。

本发明还提供了上述荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescensis）菌株pt4或者微生物菌剂在提高磷肥的利用率，改善土壤结构，提高作物的产量及品质方面的应用。

上述微生物菌剂的制备方法，包括：

（1）摇瓶培养：将活化好的荧光假单胞菌菌株pt4接种到装有NA液体培养基的三角瓶中，30℃200r/min振荡培养12h；