[发明专利]一种多功能阳离子聚合物基因载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种多功能阳离子聚合物，其特征在于，该聚合物是由低分子量壳聚糖、聚乙烯亚胺和沙坦类药物组成，其中，主链壳聚糖的分子量为10～50kDa，脱乙酰度为80～90％；聚乙烯亚胺为支链型，分子量为1800；沙坦类药物在聚乙烯亚胺上的取代度为6.76～20％，沙坦类药物-聚乙烯亚胺偶联物在主链壳聚糖上的接枝率为4～20％。

2.根据权利要求1所述的多功能阳离子聚合物，其特征在于，所述的沙坦类药物优选为奥美沙坦、缬沙坦、坎地沙坦或替米沙坦，更优选为坎地沙坦。

3.权利要求1所述的多功能阳离子聚合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)分别将沙坦类药物、碳二亚胺类缩合剂及酰化活化剂溶于N，N-二甲基甲酰胺中，将碳二亚胺类缩合剂及酰化活化剂的溶液逐滴加入到沙坦类药物的溶液中，室温下磁力搅拌反应1h，得到活化的沙坦类药物；

2)将聚乙烯亚胺溶于适当混合溶剂，滴加上述活化的沙坦类药物溶液于聚乙烯亚胺溶液中，室温下磁力搅拌反应24h，加入丙酮沉淀产物，沉淀物用水溶解，将所得溶液在去离子水中透析24h，冷冻干燥，得到沙坦类药物-聚乙烯亚胺偶联物；

3)将壳聚糖、高碘酸钾分别溶于pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液中，N₂除气并调整至4℃后，将两溶液混合并在该温度下磁力搅拌反应24h，添加乙二醇终止反应，将反应溶液在pH4.5的0.2M NaCl去离子水溶液中透析24h，接着在pH4.5的去离子水中透析24h，冷冻干燥，得到活性中间体氧化壳聚糖；

4)将上述沙坦类药物-聚乙烯亚胺偶联物及活性中间体氧化壳聚糖分别溶于去离子水中，两溶液混合后在室温下磁力搅拌反应48h，反应结束后，用硼氢化钠处理溶液，将反应溶液在pH4.5的0.2M NaCl去离子水溶液中透析24h，接着在pH4.5的去离子水中透析24h，冷冻干燥，得到终产物壳聚糖-g-聚乙烯亚胺-沙坦类药物阳离子聚合物。

4.根据权利要求3所述的多功能阳离子聚合物的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述的碳二亚胺类缩合剂及酰化活化剂分别为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺；所述的沙坦类药物、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1∶1～5∶1～5。

5.根据权利要求3所述的多功能阳离子聚合物的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述的沙坦类药物与聚乙烯亚胺结构中游离氨基的摩尔比为1∶1～8；所述的混合溶剂为水和N，N-二甲基甲酰胺的混合溶剂，混合比例为1∶1～5。

6.根据权利要求3所述的多功能阳离子聚合物的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述的高碘酸钾与壳聚糖单元的摩尔比小于2∶1。

7.根据权利要求3所述的多功能阳离子聚合物的制备方法，其特征在于，步骤4)中所述的沙坦类药物-聚乙烯亚胺偶联物含有游离氨基的结构单元与活性中间体氧化壳聚糖含有游离醛基的结构单元的摩尔比为1∶1.5～6；所述的透析袋的截留分子量为3500；所述的活性中间体氧化壳聚糖的氧化度为15％～50％。

8.权利要求1所述的多功能阳离子聚合物的应用，其特征在于，它在制备基因药物与化学药物联合给药的非病毒基因传输系统中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，用于非病毒基因传输系统的质粒DNA为含报告基因或治疗基因的能在真核细胞中表达的质粒DNA。