[发明专利]一种过氧化氢残留的快速测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种过氧化氢残留的快速测定方法。

背景技术

过氧化氢是一种强氧化剂，具有消毒、杀菌、漂白等功能，在工业及医疗领域广泛使用。在食品工业中，过氧化氢主要用于软包装纸的消毒、罐头厂的消毒剂、奶和奶制品杀菌等。食品中过氧化氢残留浓度过高对人类具有致癌的危险性，还可能加速人体衰老。所以，《食品添加剂使用卫生标准》GB2760-2002中规定：过氧化氢作为食品添加剂只能用于鲜牛乳和袋装豆腐干，同时规定在袋装豆腐干中不得有残留，其它食品中使用过氧化氢必须经过卫生部的严格审批。但是不法商人对过氧化氢在食品加工尤其是保存中的滥用严重威胁到人们的身体健康，因此，建立一种简单快速的食品中残留过氧化氢浓度测定的方法显得尤为重要。

目前用于食品和保健食品中残留过氧化氢的检测方法有很多：如氧化还原滴定法、改良4-氨基安替比啉（4-AA）比色法和氧电极法等，这些方法有的操作十分繁琐，有的需用到大型的分光光度计，均不利于食品加工企业、食品监督部门乃至广大的消费者对食品中过氧化氢残留浓度进行现场快速监测。

试纸法因无二次污染、使用方便、易于携带等优点而成为目前最受消费者青睐的一种现场检测方法。ELISA试剂盒中采用显色底物和过氧化氢来检测过氧化物酶，同样可利用该原理通过显色剂和过氧化物酶来检测过氧化氢。该方法中可采用的显色剂种类有很多，如专利ZL 200610011568.9中提到的苯酚与4-氨基安替吡啉、N,N-二甲基苯胺、2,4-二氯酚以及邻二苯酚分别组合显色，除此之外，还有四甲基联苯胺（TMB）、TMB盐、2,2-联氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)等，不同的显色剂显色灵敏度和试剂本身的稳定性有较大的差异。该方法中过氧化物酶在干燥和储存过程中极易变性而失活。研究表明蛋白酶冻干过程中常用到的冻干保护剂对过氧化物酶干燥和储存过程同样可起到保护作用；选择出灵敏度高、稳定性好的显色剂，并选择合适的pH调节剂和酶保护剂制作出灵敏度高、稳定性好的试纸是本发明的主要目的。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种过氧化氢残留的快速测定方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种过氧化氢残留的快速测定方法，包括以下步骤：将过氧化氢残留快速测定试纸浸入待测样品制成的试液中，2秒后取出，甩去试纸上多余的溶液，显色完全后，将试纸所显的颜色与标准比色卡相比较，读出过氧化氢残留的浓度数据； 

其中，过氧化氢残留快速测定试纸由以下方法制备：用纯水将辣根过氧化物酶、显色剂、pH调节剂、蛋白酶保护剂配制成混合液，将滤纸在混合液中浸泡5～30min后取出，烘干成形，裁切至设定尺寸，粘贴在底板上，制得用于测定过氧化氢残留的试纸；所述混合液中，辣根过氧化物酶的浓度为0.01～0.10g/L，显色剂的浓度为1.0～2.5 g/L。

优选的，所述显色剂为四甲基联苯胺盐酸盐、四甲基联苯胺硫酸盐、四甲基联苯胺丙磺酸盐或2,2-联氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐。

优选的，所述蛋白酶保护剂为糖、氨基酸、蛋白质和聚合物的混合物。

优选的，所述蛋白酶保护剂中，糖为蔗糖、海藻糖中的至少一种；氨基酸为甘氨酸、谷氨酸、精氨酸中的至少一种；蛋白质为牛血清蛋白、人血清白蛋白中的至少一种；聚合物为聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一种。

优选的，所述蛋白酶保护剂中，糖为海藻糖，氨基酸为甘氨酸，蛋白质为人血清白蛋白，聚合物为聚乙二醇。

优选的，所述混合液中，糖的浓度为4～20g/L，氨基酸的浓度为2～10g/L，蛋白质的浓度为1～5g/L，聚合物的浓度为4～20g/L。

优选的，所述pH调节剂为柠檬酸与磷酸氢二钠的混合物，混合液中，柠檬酸的浓度为0.028～0.044mol/L，磷酸氢二钠的浓度为0.11～0.14 mol/L。

所述标准比色卡，由以下方法制备： 

1)        用纯水配制浓度为0.5mg/L的过氧化氢标准溶液，将过氧化氢残留快速测定试纸浸入标准溶液中，2秒后取出，甩去多余的溶液，待试纸所呈现的颜色稳定后，在潘通色卡上找出对应的标准色；

2)        同步骤1）所述方法，分别获得检测浓度为1mg/L、2mg/L、4mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的过氧化氢标准溶液时试纸所呈现的标准色；

3)        根据各标准色的色值制备得到标准比色卡。

本发明的有益效果是：