[发明专利]麻保沙星快速检测试纸卡及制备方法

权利要求书

1.一种麻保沙星快速检测试纸卡，含有外壳和位于外壳内的试纸芯，试纸芯包括底板，底板上依次固定黏贴有样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，其特征是：所述胶体金标记垫吸附有麻保沙星的特异性抗体，所述检测反应区设有麻保沙星偶联载体蛋白溶液印制的隐形检测印迹，以及用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG溶液印制的隐形对照印迹；所述麻保沙星特异性抗体为胶体金标记的麻保沙星单克隆抗体或多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征是：所述麻保沙星偶联载体蛋白溶液是由以下方法制备的：

称取2 mg 麻保沙星溶解于500 μL 的DMF溶剂中，加入2 mg NHS和2 mg EDC，室温避光反应24h，得到活化的麻保沙星液；称取载体蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13 的mol/L 的PBS溶液中，将活化的麻保沙星液逐滴加入载体蛋白溶液中，密封避光于室温下搅拌4h；将反应产物置于4℃层析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天，离心除去沉淀，得到麻保沙星载体蛋白的偶联物，分装，-20℃保存，备用。

3.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征是：所述麻保沙星偶联载体蛋白

为甲状腺蛋白、鼠血清蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵血清白蛋白或血蓝蛋白。

4.根据权利要求1-3任一项所述的试纸卡，其特征是：所述底板由硬质塑胶条或不吸水的硬纸条制成；所述样品垫用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；所述吸水垫用吸水滤纸或滤油纸制成；所述检测反应区用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；所述胶体金标记垫用玻璃纤维、聚酯膜、醋酸纤维或尼龙膜制成。

5.根据权利要求1-3任一项所述的试纸卡，其特征是：所述外壳由底座和面板构成，底座和面板通过嵌合连在一起，底座上设有放置试纸芯的凹槽，面板上设有检测窗、加样孔，检测窗与试纸芯的检测反应区相对应，加样孔与试纸芯的样品垫相对应。

6.根据权利要求1-5任一项所述的试纸卡，其特征是：所述隐形检测印迹和隐形对照印迹的排列方式为“︱︱”、“＋＋”或“··”。

7.权利要求1所述麻保沙星快速检测试纸卡的制备方法，其特征是：所述制备方法包括： 

（1）麻保沙星与载体蛋白的偶联：

称取2 mg 麻保沙星溶解于500 μL 的DMF溶剂中，加入2 mg NHS和2 mg EDC，室温避光反应24h，得到活化的麻保沙星液；称取载体蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13 的mol/L 的PBS溶液中，将活化的麻保沙星液逐滴加入载体蛋白溶液中，密封避光于室温下搅拌4h；将反应产物置于4℃层析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天，离心除去沉淀，得到麻保沙星载体蛋白的偶联物，分装，-20℃保存，备用；

（2）抗麻保沙星特异性抗体的制备；

（3）麻保沙星特异性抗体的制备；

在沸腾的200mL 0.01～0.02％氯金酸溶液中加入新鲜配制的1％柠檬酸钠8mL，获得直径为10-20nm的胶体金溶液，用0.1mol/L 的K₂CO₃调pH值至8.5～9.5，置2～8℃保存，备用；以1：2000的标记比将待标记的麻保沙星单克隆抗体或多克隆抗体加入pH8.5～9.5的金溶胶中，标记10min后加入20％的PEG10000至终浓度为0.05％，4℃、1500～3000rpm离心20min，除去未结合的胶体金颗粒，4℃、15000rpm离心1h，弃上清，获初步纯化的胶体金标记物蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱层析进行分离纯化，获得麻保沙星胶体金标记抗体； 

（4）羊抗或兔抗小鼠IgG抗体的制备；

用麻保沙星特异性抗体制备胶体金标记垫；用麻保沙星偶联载体蛋白溶液印制隐形检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG抗体溶液印制隐形对照印迹；然后在底板上依次固定黏贴样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，组装成试纸芯，将试纸芯装于外壳中进而组装成试纸卡。