[发明专利]水稻抗褐飞虱主效基因Bph14的基因标记及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种水稻品种的基因标记及其应用，具体涉及一种水稻抗褐飞虱主效基因Bph14的基因标记及其应用。

背景技术

稻褐飞虱是危害水稻产量最严重的害虫之一，近十年来，我国褐飞虱连年爆发，平均每年造成水稻产量损失高达277万t。2010年农业部农作物重大病虫发生防治周报(第23期)报道，该年我国褐飞虱累计发生3.02亿亩次，严重威胁着水稻的高产和稳产。利用抗褐飞虱基因来培育抗褐飞虱品种，是控制稻褐飞虱危害最为经济有效和环境友好的途径。

国际水稻研究所自1973年利用常规手段，先后选育出一系列带有Bph1、Bph2和Bph3等抗褐飞虱主基因的水稻品种，但数年后随着褐飞虱新生物型的产生，这些品种的抗性都出现了退化。因此，发现并利用新的抗褐飞虱基因或聚合抗性基因，已成为控制褐飞虱危害的关键所在。

由于抗褐飞虱鉴定的复杂性，采用常规育种方法很难有效选育出抗虫品种，而利用与抗性基因紧密连锁或共分离的分子标记进行辅助选择，结合常规育种技术，则可以高效选择目的基因，培育抗虫品种。

迄今为止，水稻上报道了26个抗褐飞虱主效基因，其中Bph14被成功克隆，目前分子标记辅助选择育种中，对该基因的选择主要利用与之连锁的标记，如MRG2329、MRG2346、MRG2684、R1925和R2443等，而基因标记还未见报道，这在一定程度上影响了利用Bph14进行抗褐飞虱育种过程中的选择效率和准确性。

发明内容

本发明的目的是提供水稻品种B5抗褐飞虱主效基因Bph14的基因标记及其应用，在分子标记辅助选择育种中提高选育效率。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。

一种水稻抗褐飞虱主效基因Bph14的基因标记Bph14-M1，其正反引物序列如下：

正向引物(5′-3′)AGCCACTTGGTGAACTTATT

反向引物(5′-3′)GATTGACGATGAGGAGACTT

本发明还公开了所述基因标记Bph14-M1的应用方法，包括：

1、提取水稻基因组DNA；

2、使用所述正反引物序列，PCR扩增水稻基因组DNA，具体操作为：PCR采用10μL反应体系：模板DNA1.0μL，10×PCR Buffer1.0μL，25mM的MgCl₂1.0μL，2mM的dNTP1.0μL，0.3μM的引物1.0μL，Taq酶0.2U，加ddH₂O补至10μL；PCR扩增条件为：1)94℃预变性5min；2)94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，扩增32个循环3)72℃延伸5min，16℃保温；

3、电泳检测扩增产物，如果出现307bp的单条带，则表示水稻品种含纯合的抗褐飞虱基因Bph14；如果出现432bp的单条带，则表示水稻品种含纯合的褐飞虱敏感等位基因bph14；如果有307bp和432bp两条带，则表示水稻品种为Bph14/bph14杂合体。

本发明的优点是：

1)本发明所获得的标记是根据Bph14基因内部的碱基缺失设计的，为基因自身标记，故不存在遗传交换，不需要作表型鉴定。

2)本发明的标记为共显性标记，可鉴别Bph14基因座位的杂合体和纯合体，实验重复性好，结果可靠。

3)利用本发明的标记进行辅助选择育种，不仅节约成本，而且能够准确、高效地将抗褐飞虱品种B5中的Bph14基因转育到褐飞虱敏感品种中去。

附图说明

图1为Bph14的部分序列(含第一内含子)在褐飞虱抗性品种B5和敏感品种Nipponbare(日本晴)间的比对。下划线箭头表示标记Bph14-M1的前后引物序列位置；虚线表示缺失的核苷酸序列。

图2为Bph14的基因结构及标记Bph14-M1在基因中的位置。

图3为标记Bph14-M1对14个水稻品种的基因型检测结果。M为DNAmarker，1～14分别为：B5、93-11、桂朝2号、R7954、R402、R752、龙特甫B、中花11、日本晴、秀水63、02428、武育粳3号、宁恢8号、Lemont。

具体实施方式