[发明专利]由[→5)β-D-Galf(1→]糖基组成的半乳寡糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及由[→5)β-D-Galf(1→]糖基组成的半乳寡糖的制备方法。 

背景技术

糖类化合物广泛存在于自然界，具有非常重要的生物活性，在许多生理和病理过程中扮演着十分重要的角色。在自然界发现的糖类化合物中，吡喃型寡糖分布广泛，其生物学研究及合成制备发展十分迅速。相对于吡喃型寡糖，呋喃型寡糖的研究滞后许多。有关呋喃型寡糖的生物合成过程和新陈代谢机制尚未得到完全的阐释；而有关呋喃型寡糖的制备则更为少见，且不成熟。 

    含呋喃型结构的寡糖主要来源于细菌、真菌、植物和原生动物等。这类寡糖是构成上述生命体的细胞壁糖肽、糖脂、糖蛋白等的重要生物分子，起到结构支撑和信息传递作用。呋喃型半乳糖最主要的存在形式是D-半乳糖，具有两种糖苷键构型，即α-和β-；其中，β-D-呋喃型半乳糖（β-D-Galf）分布于许多致病和非致病性的微生物以及一些多细胞生物中。 

    研究显示，分支杆菌的存活能力和致病性与β-D-Galf糖基密切相关；半乳呋喃糖基转移酶，有望成为治疗细菌感染的新靶点。含有β-D-Galf糖基的糖类化合物在革兰氏阴性菌中比较常见，这些糖基存在形式包括[→2)β-D-Galf(1→]、[→3)β-D-Galf(1→]、[→5)β-D-Galf(1→]和[→6)β-D-Galf(1→]。研究表明，曲霉属和青霉属真菌的胞外多糖中主要存在[→5)β-D-Galf(1→]连接的糖基侧链，而糖基主链一般由[→2) α-D-Manp(1→] 和[→6) α-D- Manp(1→]构成。此外，一些微型藻类中也含有β-D-Galf糖基的糖化合物。综上所述，β-D-Galf糖基寡糖的制备十分必要和有意义。 

近些年，呋喃型寡糖的合成研究也有了一定的突破。一般是采用糖苷化反应将糖基片段连接起来，在采用选择性脱除保护基，进行下一步连接，即逐步增加糖链的长度。目前，有机合成的[→5)β-D-Galf(1→]寡糖的最大聚合度仅为4。在寡糖合成的过程中，因涉及羟基的保护和脱保护、糖残基间的选择性连接以及因定位修饰遇到的立体构型等系列问题，其技术难度较大、得率低、合成成本高、安全性差。 

发明内容

本发明针对以上不足之处，提供了一种由[→5)β-D-Galf(1→]糖基组成的半乳寡糖的制备方法，简化了工艺操作并提高了寡糖的制备效率。 

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是： 

由[→5)β-D-Galf(1→]糖基组成的半乳寡糖的制备方法，包含有如下步骤：

A、多糖降解：将以[→5)β-D-Galf(1→]糖基为侧链，以甘露聚糖为主链的多糖配制成质量浓度为1.0%~15%的水溶液，在搅拌状态下加入0.1-1.0 mol/L酸溶液，调节溶液的pH值到1.5-3.5，20-90 °C恒温水浴下水解1-6小时；

B、中和、浓缩：将上述溶液用碱中和至pH值到7.0，将中和后的溶液浓缩至糖的质量浓度为10.0%；

C、醇沉：将上述浓缩后的溶液加入浓缩后溶液4倍体积的醇，在4°C ——25°C下醇沉12小时，去除未降解的甘露糖主链；

D、离心、浓缩：将上述醇沉后的溶液在2000-6000g的条件下离心10-30分钟，将离心获得的上清液除醇并浓缩至原体积的五分之一；

E、分离、检测、收集：将上述浓缩后的溶液用低压柱色谱进行分离，用示差折光检测器进行检测，按洗脱峰合并收集，去除流动相，冷冻干燥即可。

进一步的所述低压柱色谱分离以0.1-0.5mol/L的碳酸氢铵水溶液为流动相，用Bio-Gel P4、Bio-Gel P6或Superdex 30为色谱柱填料。 

进一步的所述酸为盐酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、甲酸、乙酸、抗坏血酸、草酸、柠檬酸、氯乙酸、三氯乙酸和三氟乙酸中的任一种；所述碱是氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵或碳酸氢氨中的任一种；所述醇是甲醇、乙醇或异丙醇中的任一种。 

本发明的有益效果是：