[发明专利]H9N2亚型病毒、H9N2亚型病疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及H9N2亚型病毒和H9N2亚型病疫苗及其制备方法。 

背景技术

禽流感(Avian influenza，AI)是由A型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的严重危害养禽业的高度传染性疾病。禽流感病毒属于正粘病毒科，流感病毒属。血凝素（Hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶（Nueraminidase，NA）是病毒的两种主要保护性抗原，根据HA、NA的抗原性差异，可将A型流感病毒分为不同的亚型。迄今为止，A型禽流感病毒的HA已发现16种，NA有9种，分别以H1～H16、N1～N9命名，不同H抗原或N抗原之间无交叉反应。各亚型间血凝素氨基酸序列同源性70%以下，相同亚型氨基酸序列同源性为80%～90%。 

该病于1878年首次发生于意大利，以后国内外不少学者都相继报道了该病的发生及其给养鸡业造成的巨大经济损失。H9N2亚型禽流感是目前世界上分布最广泛的禽流感病毒亚型。H9N2亚型禽流感病毒最早于1966年从北美的火鸡体内分离得到，该亚型的流感病毒最初只感染火鸡，几乎不感染鸡。但从20世纪90年代以来，H9N2亚型禽流感病毒就在亚洲很多养鸡场传播开来。该病目前已流行于世界上许多国家和地区，给养禽业造成了巨大的经济损失。在我国，高致病性禽流感以H5N1亚型为代表，低致病性禽流感以H9N2亚型为主型。 

AIV血清亚型较多，不同亚型AIV甚至不同毒株对不同宿主的易感性不同，而易感性变化又会因为病毒变异而发生改变。HA基因变异率高，是病毒发生抗原变异的主要原因。NA蛋白主要和病毒的成熟和释放有密切关系，可能会影响到病毒的复制、传播等。由于禽流感病毒变异非常快，给禽流感防控带来困难，治疗性药物的研发周期较长，一定程度上影响了临床防控效果。接种疫苗是防控禽流感的主要手段，但由于禽流感病毒变异快，流行毒株多，血清学多且无交叉免疫，其作用大大受到限制。解决这一难题，有赖于对本地区流行的毒株的流行特点，变异特点进行研究以及筛选分离出合适的优势疫苗毒株，以使禽流感的防控更具有针对性和有效性。 

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本发明的目的在于提出一种H9N2亚型病毒和H9N2亚型病疫苗及其制备方法。 

在本发明的第一方面，本发明提出了一种H9N2亚型病毒，根据本发明实施例，该H9N2亚型病毒保藏编号CGMCC：7702，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，根据本发明实施例，所述的H9N2亚型病毒是是从经过正常免疫禽流感灭活疫苗的发病鸡群分离得到，其毒价EID₅₀为10^7.5～10^8.5/ml，因此，所述的H9N2亚型病毒株毒性好，具有良好的免疫原性，可作为灭活疫苗生产毒株及检验毒种。 

在本发明的第二方面，本发明提出了上述H9N2亚型病毒在制备H9N2亚型病疫苗中的用途，在本发明一个实施例中，根据H9N2亚型病毒交叉免疫保护试验证明，所述的H9N2亚型病毒具有很好的交叉免疫保护作用。因此利用该H9N2亚型病毒生产H9N2亚型病疫苗，可以有效提高H9N2亚型病疫苗的免疫原性，从而进一步提高H9N2亚型病疫苗安全性及免疫保护期。 

在本发明第三方面，本发明提出了一种H9N2亚型病疫苗，根据本发明实施例，该H9N2亚型病疫苗包括灭活的H9N2亚型病毒。从而有效提高H9N2亚型病疫苗的免疫原性，进一步提高H9N2亚型病疫苗安全性及免疫保护期。 

根据本发明实施例，本发明的上述实施例的H9N2亚型病疫苗还包括如下附加技术特征： 

根据本发明的一个实施例，所述的H9N2亚型病疫苗是通过甲醛灭活的，由此可以有效提高H9N2亚型病疫苗的免疫原性，同时可以进一步提高H9N2亚型病疫苗安全性及免疫保护期。 

在本发明第四方面，本发明提出了一种制备H9N2亚型病疫苗的方法，根据本发明实施例，该方法包括：对权利要求1所述的H9N2亚型病毒进行灭活，以便获得经过灭活的H9N2亚型病毒；利用所述经过灭活的H9N2亚型病毒制备水相；以及将所述水相与油相进行混合乳化，以便获得所述H9N2亚型病疫苗。由此，可以有效提高H9N2亚型病疫苗的免疫原性，从而进一步提高H9N2亚型病疫苗安全性及免疫保护期。 

根据本发明一个实施例，本发明上述实施例的制备H9N2亚型病疫苗的方法还包括如下附加技术特征：