[发明专利]一种生物组织培养法繁育苏玛栎优株的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物快繁方法技术领域，具体为生物组织培养繁育，尤其涉及了一种生物组织培养法繁育苏玛栎优株的方法。

背景技术

苏玛栎（Quercus shumardii)初期生长速度快，年高生长量可达1m，是美国重要的用材树种之一，自2001年引种上海种植以来，亦表现出良好的抗逆性和园林观赏价值。叶形奇特，具深裂，夏季叶片呈亮绿色，秋叶红艳可爱，不仅是良好的城市园林及工业区绿化树种，也是优美的观叶树种。耐水湿，比其他栎类易移栽，因此可做为低湿地重要造林树种和用材树种，具有广泛的应用前景。目前栎类树种采用播种繁殖，由于长期的有性繁殖，造成种群内个体所具有的遗传基因复杂，实生苗间存在着十分显著的变异，丰富的个体变异，为遗传改良创造了有利条件。栎树体内含单宁等阻碍生根物质，属很难生根树种，有关栎树扦插组培成功的报道很少，解决栎类树种的无性繁殖难题是加快栎树优良材料推广利用的前提条件，但多家研究机构在苏玛栎扦插、嫁接试验中，结果相似，成活率极低。有关栎树组培成功报道也很少，国内仅见在大叶栎、栓皮栎上有所报道，但增殖率、生根率以及移栽成活率普遍比较低。

本技术在单株选优的基础上，采用直接器官发生形式，通过对培养基成分、激素配比以及培养环境因子的确定，建立了苏玛栎完整的再生体系，以芽繁芽进行组培快繁生产出来的试管苗无变异发生，可以保持母本的优良性状，使得这一昂贵的外来物种得以保存和繁育，为后期的推广应用奠定了技术基础和优质种苗。

发明内容

本发明针对现有技术中苏玛栎树体内含单宁等阻碍生根物质，很难生根，而采用扦插、嫁接，成活率极低等缺点，提供了一种环剥苏玛栎获得基部萌条，取带腋芽的萌条作为外植体，通过初代培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养获得生根试管苗、生根试管苗进行移栽，具有不受季节限制以及环境易控的优点，同时提高了苏玛栎的繁殖速度，降低了引种费用。

本发明中所用到的培养基及激素包括：WPM培养基（Murashing and Skoog medium，以下简称WPM），WPM配方中的药品成分和培养基的具体配制方法为现有公知技术，在此不再赘述。1/2WPM是指WPM培养基中大量元素减半，而其余药品成分不变。附加的植物激素为6-苄基氨基嘌呤(6-benzylaminopurine，简称为6-BA)、奈乙酸（naphthylene acetic acid，简称为NAA）、吲哚丁酸（3-Indolebutyric acid，简称为IBA），基本培养基中所用药剂和各类激素可由sigma公司购得。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：

一种生物组织培养法繁育苏玛栎优株的方法，包括以下步骤：a、环剥苏玛栎获得基部萌条；b、在基部萌条中选取带腋芽的萌条作为外植体，经表面消毒；c、初代培养、d、增殖培养；e、壮苗培养；f、生根培养获得生根试管苗；g、生根试管苗进行移栽。 

作为优选，所述的具体步骤如下：

a、在气温回升的春季，于优树树干基部进行环割，深至韧皮部，待萌芽条萌动并生长至5~20 cm时，选择晴朗天气的午后采集获得基部萌条；

b、在基部萌条中选择生长健壮，无病虫害的苏玛栎带腋芽的萌条做为起始外植体，用洗洁精擦洗表面后，流水冲洗20分钟，再进行消毒处理；

c、将消毒处理后的外植体接种到初代培养基上，进行初代培养；

d、将初代培养的无菌苗转入增殖培养基，诱导不定芽；

e、将诱导出的丛生芽分切后，转移至壮苗培养基，进行壮苗培养；

f、将经壮苗培养生长到1.5cm以上的试管苗分切后，转移至生根培养基中；

g、对所得的生根试管苗进行清洗，移至珍珠岩、草炭土的混合基质中进行栽种。

原先应该有芽的位置长出来的是定芽，如顶芽、腋芽等位置长出的；原先不可能长芽的位置长出来的是不定芽，如叶片、茎段的切口处。丛生芽是由植物器官和愈伤组织发育出来的群体丛生芽苗，大多是多细胞形成，双极性，结构完整，可直接形成小植株，成苗率高，去分化容易，再分化中等。本专利中的不定芽主要是茎段切口处长出的芽，丛生芽是属于不定芽中结构完整，可直接形成小植株的芽体。步骤f中的试管苗即在壮苗培养基上培养的无菌苗，壮苗培养获得试管苗，生根试管苗指生根培养基上培养的无菌苗，生根培养获得生根试管苗。