[发明专利]猪胸膜肺炎放线杆菌内毒素抗体快速检测试纸条

说明书

一、技术领域

本发明是一种涉及猪胸膜肺炎放线杆菌内毒素（ApxIV）抗体的检测试剂显示器具，特别是涉及一种可检测猪胸膜肺炎放线杆菌内毒素（ApxIV）抗体的检测试纸条。

二、技术背景

猪胸膜肺炎是由猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的猪的一种急性、热性、高度传染性的呼吸道疾病。猪胸膜肺炎放线杆菌为巴氏杆菌科放线杆菌属的成员，是一种革兰氏染色阴性小球杆菌，有的呈纤细杆状或丝状，表现为多形态性和两极着色性。有荚膜，有菌毛，无芽孢。临床上以急性出血性纤维素性胸膜肺炎和慢性纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征。本病分布于世界许多国家和地区，是一种世界性疾病，目前呈上升的流行趋势。我国于1987年证实存在本病，给规模化养猪场造成重大的经济损失。天气的变化和秋冬季节的来临易导致本病的发生与流行，应引起高度重视，采取有力措施，避免寒冷季节本病的发生与流行。

病猪、隐性感染的带菌猪是本病的主要传染源，特别是亚临床感染的母猪是病原的主要贮存宿主，在本菌的传播中起重要作用。本病虽然不会通过垂直传播感染仔猪，但可通过直接接触经呼吸道传染，影响到仔猪的安全。通过空气传播，可从一个发病猪舍跳跃式传给另一个猪舍。也可以通过接触被病原污染的车辆、工具、器械以及饲养人员流动等间接传播。啮齿类动物和鸟类也可传播本病。各种年龄、性别的猪只都有易感性，其中以6～16周龄的猪发病较多，以3月龄的猪发病率最高，可达80％～100％，死亡率一般为50％。

猪胸膜肺炎是当前危害世界各国养猪业的主要疾病之一。目前APP共发现有15种血清型，并且各个国家流行的优势血清型各不相同。不同血清型之间及同一血清型的不同菌株的毒力均存在差异，致病性也有强弱之分，从而导致该病的诊断和治疗非常困难。近几年来的研究表明，与病原菌毒力相关的因子有毒素、荚膜、外膜蛋白、脲酶等，其中毒素既是主要的毒力因子，也是主要的免疫原，可作为诊断抗原建立血清学检测方法，还可以用于诊断和衡量免疫状态，因此毒素研究已成为该病的研究热点。APP共有4种毒素，即毒素                                                、Ⅱ、 以及最近发现的毒素Ⅳ，它们均属于RTX (Repeatsinthe structural，RTX)毒素家族。近年发现，没有一种血清型的APP能同时分泌4种毒素，但APP所有血清型在感染动物体内都能分泌ApxlV毒素蛋白，而体外培养的细菌却不能分泌该毒素。因此，在动物体内检测到ApxlV毒素，就能证明APP的感染，ApxlV毒素蛋白在建立诊断方法方面具较大的理论价值和应用前景，可用于区别诊断APP的感染与非感染。目前对上述疾病及抗体的检测方法主要有以下几种。

(1) 显微镜检。取鼻腔与支气管的分泌物或肺部病变材料涂片，革兰氏染色，显微镜检查，如见到多形态的两极浓染的革兰氏阴性的小球杆菌或纤细杆菌，可作进一步鉴定。

(2)病原分离鉴定。无菌取病料，用5％绵羊血液琼脂平板与金黄色葡萄球菌交叉划线接种，在5％～10％二氧化碳浓度条件下37℃培养24小时，在金黄色葡萄球菌周围有卫星菌落，再进行脲酶及甘露糖发酵等生化鉴定。并进行环磷酸腺苷(CAMP)试验、溶血性测定以及血清型等检查。

(3)血清学诊断。荧光抗体技术可用于特异抗原或抗体的检查；酶联免疫吸附试验(ELISA)与补体结合试验可用于检测抗体，查出隐性感染的猪只。间接血凝试验(IHA)，APP的间接血凝试验用于APP的检测与分型。乳胶凝集试验是一种简便快速的检测方法，它既可以用于APP的诊断，也可用于APP抗体检测。以酶联免疫吸附试验技术进行APP和抗体的血清学诊断，可以分为型特异性ELISA 和种特异性ELISA。前者是只能对一种血清型的APP做出检测，后者是对所有血清型的APP都可做出检测。

上述检测方法需要专业人员在实验室操作，操作繁琐，检测费时费力；而且需要昂贵的仪器设备，如酶标仪等，对非专业人员而言，上述检测方法很难完成。虽然上述方法特异敏感，但无法实现现场快速检测或诊断。本发明，研究一种简便快速、实时在线检测试纸，对控制和消灭此疾病意义重大。

三、发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中检测猪胸膜肺炎放线杆菌内毒素ApxIV抗体存在的缺点，提供一种特异、敏感、简便快速检测猪胸膜肺炎放线杆菌内毒素抗体的方法，研制出检测猪胸膜肺炎放线杆菌内毒素ApxIV抗体的检测试纸条。