[发明专利]一种检测胎膜早破免疫层析试纸的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫层析试纸的制备方法，具体涉及一种检测胎膜早破免疫层析试纸的制备方法。

背景技术

免疫层析试纸是一种利用层析原理将待检测液中的目标检测分子或成分等在试纸条上流动至检测线（T线）和质控线（C线），当检测线发生颜色变化则说明检测结果为阳性，否则为阴性，当质控线发生颜色变化时，则说明检测结果有效，否则无效。

免疫层析试纸在检测或诊断某些疾病时具有非常便利的优点，因此其已被充分运用到多种疾病或症状的检测或诊断过程中，例如早孕试纸。一般情况下，免疫层析试纸包含有以下几种构成：样品垫、胶体金结合垫、层析膜、吸水垫、胶板，所述样品垫、胶体金结合垫、层析膜和吸水垫依次粘贴在胶板上；所述层析膜上依次设置有检测线和质控线；其工作原理为：将待测液滴加至样品垫上，待测液利用层析原理流向胶体金结合垫，待测液溶解胶体金结合垫中的胶体金结合物，并与其共同依次流向层析膜上的检测线和质控线；当待测液中含有目标检测分子，则目标检测分子、胶体金结合物会与检测线内包含的抗体成分结合从而形成免疫复合物，同时检测线颜色发生变化；当待测液流至质控线时，质控线内包含的抗体成分会与胶体金结合物结合，从而质控线颜色发生变化。

胎膜破裂（Rupture of Fetal Membrane，简称ROM）在孕期可能随时发生，在临产前发生的胎膜破裂称为胎膜早破（PROM）。足月后（37孕周后）PROM的发生率约为10%，足月前（37孕周前）PROM的发生率为2-3.5%。胎膜早破是引起产科病人产前、产后并发症的主要因素，也是导致胎儿早产和新生儿必须入住重症监护室的主要原因。由于医务人员不得不在延长孕周与宫内及孕妇感染的风险和胎儿肺发育问题之间求平衡，因而对胎膜早破患者的管理成本高、难度大，准确及时诊断孕妇是否发生胎膜早破至关重要。

现有检测胎膜早破的方法中除以往的临床询问病史等方法外，主要以妊娠妇女阴道分泌物中的细胞间粘附分子-1（简称ICAM-1）为检测指标的检测工具为较新的方法。其中以ICAM-1为检测指标的检测胎膜早破免疫层析试纸对于产科病人及时诊断是否发生胎膜早破起到了较好的效果；所述免疫层析试纸的检测线内包被有羊抗人ICAM-1多克隆抗体工作液，质控线内包被有羊抗鼠IgG工作液，胶体金结合物中含有鼠抗人ICAM-1单克隆抗体。

现有的以ICAM-1为检测指标的检测胎膜早破免疫层析试纸虽然为产科病人提供了便利，但其灵敏性、特异性以及准确度均不够理想，从而容易造成误诊，对产科病人来说同样会造成不便。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种检测胎膜早破免疫层析试纸的制备方法，该制备方法制备所得的检测胎膜早破免疫层析试纸的灵敏性和特异性有较明显的提高，分别可达到97%以上和93%以上，从而减少误诊的发生率。

为解决以上技术问题，本发明的技术方案是采用一种检测胎膜早破免疫层析试纸的制备方法，所述制备方法包括有以下步骤：

A、羊抗人可溶性细胞间粘附分子-1多克隆抗体作为检测线的工作液，羊抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线的工作液；检测线工作液浓度为1.5-2.5mg/mL，质控线工作液浓度为0.5-1.5mg/mL，将所述检测线工作液和质控线工作液在硝酸纤维素膜上进行包被，所得硝酸纤维素膜在36-38℃下干燥8-12小时得层析膜；

B、将鼠抗人可溶性细胞间粘附分子-1单克隆抗体和胶体金制备成胶体金结合垫；

C、将A和B步骤所得的层析膜和胶体金结合垫按照样品垫、胶体金结合垫、层析膜、吸水垫的顺序依次粘贴在胶板上制备得所述检测胎膜早破免疫层析试纸。

优选的，所述A步骤中检测线工作液浓度为2.5mg/mL，质控线工作液浓度为1.5mg/mL。

优选的，所述A步骤中经包被后的硝酸纤维素膜在38℃下干燥10小时。

优选的，所述B步骤中胶体金为采用以下方法制备而成：将0.005g-0.03g/100mL的氯金酸水溶液加热至沸，搅拌下加入浓度为0.5-2g/100mL的柠檬酸三钠水溶液，加入量为每100mL氯金酸水溶液中加入2-3mL，煮沸3-10分钟，冷却后用K₂CO₃水溶液调节pH值至6.0-7.0得胶体金。

优选的，所述B步骤中氯金酸水溶液的浓度为0.01g/100mL。

优选的，所述B步骤中加入的柠檬酸三钠水溶液的浓度为2g/100mL。

优选的，所述B步骤中加入的柠檬酸三钠水溶液的体积为2.5mL。