[发明专利]一种鲑科鱼卵发育过程的观测方法

权利要求书

1.一种鲑科鱼卵发育过程的观测方法，其特征在于它是通过以下步骤实现的：

一、前期准备：首先准备观测所需工具，包括：捞鱼网、规格为5ml的采样管、小镊子、解剖针、载玻片、带有拍照功能的解剖镜；然后配制鱼卵固定液，称取20g~50g的苦味酸放入盛有400ml~600ml蒸馏水的烧杯中，用玻璃棒反复搅动20min~40min后，将烧杯口用封口膜封紧，放置于3℃~5℃的冰箱中，放置20h~28h后，用滤纸过滤并取上清液，量取350ml~450ml此上清液放入另一个烧杯中，并向此烧杯中加入80ml~120ml甲醛和16ml~24ml冰醋酸，混合均匀后，装入不透明且带盖的容器中，放置于3℃~5℃的冰箱中备用；

二、样品采集：鲑科鱼类受精卵孵化水温为7℃~9℃，需要18d~22d才能孵化破膜，具体采样间隔如下：受精后0h~3h内，每间隔15min采样一次；受精后3h~8h内，每30min采样一次；受精后8h~33h内，每间隔1h采样一次；受精后33h~81h内，每间隔2h采样一次；受精后81h~129h内，每间隔6h采样一次；受精后129h~215h每间隔12h采样一次；受精后215h至破膜时，每间隔24h采样一次；样品采集过程：首先在每个采样管上注明不同的标号和不同的发育期，然后向每个采样管中注入2ml~4ml步骤一中配制的鱼卵固定液，每次采样时取受精卵15个~20个放入到装有鱼卵固定液的采样管中，摇晃1min~3min后，将采样管放置于3℃~5℃的冰箱中，20h~28h后将采集的受精卵更换一次等量的步骤一中配制的鱼卵固定液，即完成鲑科鱼类受精卵的样品采集；

三、发育观测：从固定液中取出鱼卵放在载破片上，鱼卵的胚体朝上，用镊子夹住鱼卵，用解剖针轻轻剥掉卵膜，放在解剖镜下观测，并拍照，根据每个采样管上注明的不同标号和不同发育期，全程记录鲑科鱼类由受精后0h~破膜时的整个发育过程。

2.如权利要求1所述的一种鲑科鱼卵发育过程的观测方法，其特征在于步骤一中称取25g~45g的苦味酸放入盛有450ml~550ml蒸馏水的烧杯中，用玻璃棒反复搅动25min~35min。

3.如权利要求1所述的一种鲑科鱼卵发育过程的观测方法，其特征在于步骤一中称取35g的苦味酸放入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，用玻璃棒反复搅动30min。

4.如权利要求1至3中任一项所述的一种鲑科鱼卵发育过程的观测方法，其特征在于步骤一中将烧杯口用封口膜封紧，放置于4℃的冰箱中，放置24h。

5.如权利要求1所述的一种鲑科鱼卵发育过程的观测方法，其特征在于步骤一中量取380ml~420ml此上清液放入另一个烧杯中，并向此烧杯中加入90ml~110ml甲醛和18ml~22ml冰醋酸，混合均匀。

6.如权利要求1所述的一种鲑科鱼卵发育过程的观测方法，其特征在于步骤一中量取400ml此上清液放入另一个烧杯中，并向此烧杯中加入100ml甲醛和20ml冰醋酸，混合均匀。

7.如权利要求1、2、3、5和6中任一项所述的一种鲑科鱼卵发育过程的观测方法，其特征在于步骤二中向每个采样管中注入2.5ml~3.5ml步骤一中配制的鱼卵固定液，每次采样时取受精卵16~18个放入到装有鱼卵固定液的采样管中。

8.如权利要求1、2、3、5和6中任一项所述的一种鲑科鱼卵发育过程的观测方法，其特征在于步骤二中向每个采样管中注入3ml步骤一中配制的鱼卵固定液，每次采样时取受精卵17个放入到装有鱼卵固定液的采样管中。

9.如权利要求7所述的一种鲑科鱼卵发育过程的观测方法，特征在于步骤二中将采样管放置于3.5℃~4.5℃的冰箱中，22h~26h后将采集的受精卵更换一次等量的步骤一中配制的鱼卵固定液。

10.如权利要求7所述的一种鲑科鱼卵发育过程的观测方法，特征在于步骤二中将采样管放置于4℃的冰箱中，24h后将采集的受精卵更换一次等量的步骤一中配制的鱼卵固定液。