[发明专利]一种重组甘露聚糖酶及其基因工程菌和水解制备甘露寡糖的方法有效
| 申请号： | 201210591856.1 | 申请日： | 2012-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN103146724A | 公开（公告）日： | 2013-06-12 |
| 发明（设计）人： | 马立新;赵西选;喻诗;李晔星;王亚平;姚永兰 | 申请（专利权）人： | 湖北大学;湖北花果山实业有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N1/19;C12N15/81;C12N9/42;C12P19/14;C12R1/84 |
| 代理公司： | 武汉金堂专利事务所 42212 | 代理人： | 丁齐旭 |
| 地址： | 430062 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 甘露 聚糖 及其 基因工程 水解 制备 寡糖 方法 | ||
1.一种重组甘露聚糖酶基因，其特征在于：
优化后的序列为：
atgttgccaa aggcttctcc agccccatcc acttcttcta gtgccgcctc tacatctttt 60
gcatctactt ctggcttgca gtttactatt gatggtgaaa ctggttattt tgctggtact 120
aactcttact ggattggttt tttgactgat aacgctgatg ttgatttggt catgggtcat 180
ttgaagtctt caggattgaa gattttgaga gtttggggtt ttaacgatgt cacttctcaa 240
ccatctagtg gtactgtttg gtatcaacta catcaggatg gcaagtctac tattaacaca 300
ggtgctgacg gtttgcagag attggattac gttgtcagtt cagccgaaca gcacgatatc 360
aaacttatca taaacttcgt gaattattgg acagactacg gcggcatgtc tgcatacgtt 420
tctgcttacg gtggatctgg tgagactgat ttttacactt ctgacactat gcaaagtgct 480
taccagacct acattaagac agttgtcgag cgttactcta attcctctgc tgtttttgct 540
tgggaattgg ctaacgaacc aagatgtcct tcttgcgata cttcagtcct atataactgg 600
atcgagaaga cctctaagtt catcaagggc ttggacgccg atagaatggt ttgtattggt 660
gacgaaggtt ttggtttgaa tattgactcc gatggttctt acccatacca attctctgaa 720
ggtctgaact ttaccatgaa cctaggcata gatactatcg actttggaac tctgcacttg 780
tatccagatt catggggtac gtctgatgat tggggtaatg gctggatcac cgctcatgga 840
gccgcctgca aggcagctgg taaaccttgt ttgttggagg aatacggtgt aacatctaat 900
cactgttctg tggaaggttc ttggcagaag actgctttgt ctaccactgg tgtgggagct 960
gatttgtttt ggcagtacgg agacgatttg agtactggaa agtctcccga tgatggtaac 1020
acaatttact acggtacttc cgactatcag tgcttggtta cagatcatgt tgcagctatc 1080
ggttctgct 1089
设计的引物序列为：
man-1GTCAATGTTGCCAAAGGCTTCTCCAGCCCCATCCACTTCTTCTAG
man-2TAGATGCAAAAGATGTAGAGGCGGCACTAGAAGAAGTGGATGGGGC 46
man-3GCCTCTACATCTTTTGCATCTACTTCTGGCTTGCAGTTTACTATTG 46
man-4CAGCAAAATAACCAGTTTCACCATCAATAGTAAACTGCAAGCCAGA 46
man-5GGTGAAACTGGTTATTTTGCTGGTACTAACTCTTACTGGATTGGTT 46
man-6ACATCAGCGTTATCAGTCAAAAAACCAATCCAGTAAGAGTTAGTAC 46
man-7TTTTGACTGATAACGCTGATGTTGATTTGGTCATGGGTCATTTGAA 46
man-8TCTCAAAATCTTCAATCCTGAAGACTTCAAATGACCCATGACCAAA 46
man-9TCTTCAGGATTGAAGATTTTGAGAGTTTGGGGTTTTAACGATGTCA 46
man-10ACAGTACCACTAGATGGTTGAGAAGTGACATCGTTAAAACCCCAAA 46
man-11TCAACCATCTAGTGGTACTGTTTGGTATCAACTACATCAGGATGGC 46
man-12AGCACCTGTGTTAATAGTAGACTTGCCATCCTGATGTAGTTGATAC 46
man-13AGTCTACTATTAACACAGGTGCTGACGGTTTGCAGAGATTGGATTA 46
man-14GTGCTGTTCGGCTGAACTGACAACGTAATCCAATCTCTGCAAACCG 46
man-15ACTTCAGCCCAACAGCACCATATCAAACTTATCATAAACTTCCTGA 46
man-16CGCCCTAGTCTCTCCAATAATTCACGAAGTTTATCATAAGTTTGAT 46
man-17TATTCGACAGACTACGGCGGCATGTCTGCATACGTTTCTGCTTACG 46
man-18TAAAAATCAGTCTCACCAGATCCACCGTAAGCAGAAACGTATGCAG 46
man-19GGATCTGGTGAGACTGATTTTTACACTTCTGACACTATGCAAAGTG 46
man-20CTGTCTTAATGTACGTCTGCTAAGCACTTTGCATAGTGTCAGAAGT 46
man-21CTTACCAGACCTACATTAAGACAGTTGTCGAGCGTTACTCTAATTC 46
man-22AATTCCCAAGCAAAAACAGCAGAGGAATTAGAGTAACGCTCGACAA 46
man-23TGCTGTTTTTGCTTGGGAATTGGCTAACGAACCAAGATGTCCTTCT 46
man-24AGTTATATAGGACTGAAGTATCGCAAGAAGGACATCTTGGTTCGTT 46
man-25CCCATACTTCACTCCTATATAACTGCATCGAGAAGACCTCTAAGTT 46
man-26CTATCCGCGTCCAAGCCCTTGATGAACTTAGACGTCTTCTCGATCC 46
man-27GGCTTCGACGCCGATAGAATGGTTTGTATTGGTGACGAAGGTTTTG 46
man-28AACCATCGGAGTCAATATTCAAACCAAAACCTTCGTCACCAATACA 46
man-29TTTGAATATTGACTCCGATGGTTCTTACCCATACCAATTCTCTGAA 46
man-30ACGTTCATGCTAAAGTTCACACCTTCAGAGAATTCGTATGCGTAAG 46
man-31GTCTGAACTTTACCATGAACCTAGGCATAGATACTATCGACTTTGG 46
man-32AATCTCGATACAAGTGCAGAGTTCCAAAGTCGATAGTATCTATGCC 46
man-33ACTCTGCACTTGTATCCAGATTCATGGGGTACGTCTGATGATTGGG 46
man-34TCCATGAGCGGTGATCCAGCCATTACCCCAATCATCAGACGTACCC 46
man-35TCCATCACCCCTCATGGAGCCGCCTCCAACGCAGCTCGTAAACCTT 46
man-36ATGTTACACCGTATTCCTCCAACAAACAAGGTTTACCAGCTGCCTT 46
man-37TGGAGGAATACGGTGTAACATCTAATCACTGTTCTGTGGAAGGTTC 46
man-38TGGTAGACAAAGCAGTCTTCTGCCAAGAACCTTCCACAGAACAGTG 46
man-39AGAAGACTGCTTTGTCTACCACTGGTGTGGGAGCTGATTTGTTTTG 46
man-40AGTACTCAAATCGTCTCCGTACTGCCAAAACAAATCAGCTCCCACA 46
man-41TACGGAGACGATTTGAGTACTGGAAAGTCTCCCGATGATGGTAACA 46
man-42ATAGTCGGAAGTACCGTAGTAAATTGTGTTACCATCATCGGGAGAC 46
man-43TTTACTACGGTACTTCCGACTATCAGTGCTTGGTTACAGATCATGT 46
man-44AGCAGAACCGATAGCTGCAACATGATCTGTAACCAAGCAC
man-45GGCCATTAATGGTGATGGTGATGGTGAGCAGAACCGATAGCTGCAACAT
利用套叠PCR的方法合成该重组β-甘露聚糖酶基因，设计的引物长度为40-50bp，相邻两引物之间有20bp左右重叠序列，Tm值为55-60℃。
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