[发明专利]微型高效莱克多巴胺免疫亲和纯化富集柱制备及应用

权利要求书

1.一种微型高效莱克多巴胺免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于：    

1）将经免疫亲和纯化的莱克多巴胺特异性多克隆抗体和过碘酸活化的琼脂糖混匀，在摇床上室温反应30 分钟，然后在4℃冰箱静置30分钟后加入硼氢化钠还原，用蒸馏水清洗未结合的抗体，用磷酸缓冲液清洗填料，10倍填料体积/次，洗4次，滴干磷酸缓冲液后加入等体积甘油，混匀，得到莱克多巴胺免疫亲和填料； 

2）在特制的塑料柱内下端装上过滤膜，将莱克多巴胺免疫亲和填料装入柱中，25μL/柱，填料上层盖上过滤膜，即得所述的莱克多巴胺免疫亲和纯化富集柱。

2.根据权利要求1所述的方法制备的莱克多巴胺免疫亲和纯化富集柱，包括偶联有免疫亲和纯化的莱克多巴胺特异性多克隆抗体的琼脂糖填料及装载该填料的特制塑料柱。

3.根据权利要求1所述的莱克多巴胺免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于：所述的免疫亲和纯化的莱克多巴胺特异性多克隆抗体是用莱克多巴胺与溴乙酰氯反应得到衍生物莱克多巴胺溴乙酰酯溶液，用反向高效液相色谱HPLC纯化该溶液得到纯化后的莱克多巴胺溴乙酰酯，将纯化后的莱克多巴胺溴乙酰酯与载体蛋白偶联，得到的偶联物作为免疫原免疫动物，得到抗血清，同时用该纯化后的莱克多巴胺溴乙酰酯与经活化的琼脂糖反应制备纯化抗体用的免疫亲和柱，用该亲和柱一步提取抗血清得到莱克多巴胺特异性多克隆抗体。

4.根据权利要求3所述的莱克多巴胺免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于：所述的莱克多巴胺溴乙酰酯是将莱克多巴胺标准品在三乙胺催化下与溴乙酰氯反应得到衍生物莱克多巴胺溴乙酰酯溶液。

5.将此莱克多巴胺溴乙酰氯酯溶液用制备型高效液相色谱仪反向柱色谱分离纯化出相对于莱克多巴胺标准品峰后移，且具有莱克多巴胺紫外光吸收光谱特征的单一主峰组分，收集该主峰组分得到纯化的莱克多巴胺溴乙酰酯。

6.根据权利要求3所述的莱克多巴胺免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于：所述的莱克多巴胺溴乙酰酯是将莱克多巴胺标准品在三乙胺催化下与溴乙酰氯反应得到衍生物莱克多巴胺溴乙酰酯溶液。

7.将此莱克多巴胺溴乙酰氯酯溶液用制备型高效液相色谱仪反向柱色谱分离纯化出相对于莱克多巴胺标准品峰后移，且具有莱克多巴胺紫外光吸收光谱特征的单一主峰组分，收集该主峰组分得到纯化的莱克多巴胺溴乙酰酯。

8.根据权利要求3所述的莱克多巴胺免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于：所述的用纯化后的莱克多巴胺溴乙酰酯与经活化的琼脂糖反应制备纯化抗体用的免疫亲和柱，是将经活化的琼脂糖与赖氨酸反应得到氨基化的琼脂糖，再将氨基化的琼脂糖与NHS-碘乙酸反应后，再用DTT还原，得到巯基化的琼脂糖，将巯基化的琼脂糖和莱克多巴胺溴乙酰酯快速混匀，室温反应60分钟，得到化学共价键复合体莱克多巴胺溴乙酰-琼脂糖填料，将填料装柱，洗去多余的DTT，得到提纯莱克多巴胺特异性抗体用的免疫亲和柱。

9.根据权利要求1或2所述的莱克多巴胺免疫亲和纯化富集柱和莱克多巴胺胶体金试纸条联用。