[发明专利]一种可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子印迹聚合物，特别是一种可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法。

背景技术

硬毛素（hispidin）是多种药用真菌的活性成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤细胞增殖、抑制HIV-1复制、抗老年痴呆等生物学活性。研究发现硬毛素对蛋白激酶C具有较强的抑制作用，这可能是它诱导肿瘤细胞凋亡的原因之一。然而，目前报道的硬毛素的天然来源有限，主要来自针层孔菌属和针孔菌属的菇类，如桑黄菌（phellinus igniarius）、桦褐孔菌（Inonotus obliquus）、斜生褐孔菌（Phaeoporus obliquus）等。因此，进一步开发含有硬毛素的天然资源有着重要的实际意义。

分子印迹技术是在抗原-抗体相互作用机理的影响下发展起来的。利用目标分子作为模板，并将其与具有结构互补的功能单体通过共价键或非共价键的方式相结合，并加入交联剂进行聚合反应，再去除模板分子后，会得到与模板分子在空间结构和功能基团上完全匹配的印迹聚合物。由于这种印迹聚合物对模板分子具有专一的识别能力，并且具有良好的物理化学稳定性，以及使用寿命长等优点，使得分子印迹技术在手性药物分离、固相萃取、临床药物分析、膜分离技术、模拟酶催化、仿生传感器等领域都展现了良好的应用前景。固相萃取技术具有易收集、操作简单、富集倍数大等优点，是一种常用的样品前处理方法。因此，采用分子印迹聚合物作为固相萃取分离富集材料，可以建立一套快速、准确、简便的分离目标物的提取分离方法。

发明内容

本发明的目的是针对上述技术分析，提供一种可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法，利用这种分子聚合物与模板分子在空间结构和结合位点的完全匹配，直接从天然产物中分离富集硬毛素，建立一种能够快速、安全、简便的硬毛素提取分离方法。

本发明的技术方案：

一种可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法，以硬毛素为模板分子、以四氢呋喃和异辛烷的混合溶剂为致孔剂、以丙烯酰胺为功能单体、以乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，以偶氮二异丁腈为引发剂，步骤如下：

1）将模板分子硬毛素和功能单体丙烯酰胺溶解在致孔剂四氢呋喃和异辛烷的混合溶剂中，混匀并搅拌2h；

2）加入交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯，混匀并搅拌10min；

3）再加入引发剂偶氮二异丁腈，混匀并搅拌10min，得到混合液；

4）将上述混合液吹氮脱氧4min、恒温60℃下水浴72h，得到块状聚合物；

5）将上述块状聚合物磨碎，用分级筛进行筛选并保留60目-100目的聚合物颗粒，然后将聚合物颗粒通过索氏抽提液抽提以去除未反应物，抽提时间为48h，得到分子印迹聚合物；

6）将上述分子印迹聚合物在温度为60℃下干燥，即可制得可富集硬毛素的分子印迹聚合物。

所述致孔剂中四氢呋喃和异辛烷的体积比为5:1。

所述模板分子、功能单体和交联剂的摩尔比为1:5:35。

所述引发剂偶氮二异丁腈的加入量为致孔剂、功能单体和交联剂总质量的0.25%。

所述索氏抽提液为体积比为9：1的甲醇和乙酸的混合液。

一种上述方法制备的可富集硬毛素的分子印迹聚合物的应用，用于从桑黄菌中分离、富集以提取硬毛素。

本发明的优点和积极效果是：该制备方法工艺简单、成本低、易于实施，制备的分子印迹聚合物可用于从天然产物中分离提取硬毛素且专一性强、使用寿命长，特别是对于一些硬毛素含量很低的天然产物，可实现快速富集纯化。

附图说明

附图为应用该分子印迹聚合物分离桑黄菌粗提物中的硬毛素的测试图。

图中：峰A为硬毛素的测试值；曲线（1）为桑黄菌粗提物的测试值，曲线（2）为经过硬毛素分子印迹柱分离纯化得到的洗脱液的测试值。

具体实施方式

实施例：

一种可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法，步骤如下：

1）将61.5mg硬毛素和88.85mg丙烯酰胺溶解在10mL四氢呋喃和2mL异辛烷的混合溶剂中，混匀并搅拌2h；

2）加入1647μL乙二醇二甲基丙烯酸酯，混匀并搅拌10min；

3）再加入30mg偶氮二异丁腈，混匀并搅拌10min，得到混合液；

4）将上述混合液吹氮脱氧4min，密封置于恒温水浴锅中在60℃下反应72h，得到块状聚合物；