[发明专利]人肠道病毒71型C4亚型致死株SD095及其应用

说明书

技术领域

本发明属于病毒学及免疫学领域，具体地说，涉及人肠道病毒71型C4亚型致死株SD095及其应用。

背景技术

手足口病（Hand,foot and mouth diseases，HFMD）是一种全球范围内广泛流行的粪口传播的疾病，世界上大部分地区均有此病流行的报导。长期以来，轻度的手足口病在世界范围内周期性爆发。该病于1957年在新西兰首次报道，1958年首次分离出柯萨奇病毒，1959年提出手足口病的名称。1969年美国从中枢神经系统疾病的婴儿粪便标本中首次分离出肠道病毒71(Enterovirus 71，EV71)。手足口病流行的间隔期为2-3年，早期的病原体以CoxA16型为主，后来EV71与CoxA16交替出现，成为手足口病的主要病原体。20世纪70年代中期，保加利亚、匈牙利相继爆发以中枢神经系统为主要临床特征的EV71流行。1994年英国爆发了Cox A16引起的手足口病。

20世纪90年代后期，EV71在亚太地区的流行呈逐年上升趋势，由此引起的手足口病在东南亚地区广泛流行，感染后常导致患者发生严重的中枢神经系统症状，死亡率较高。1997年马来西亚爆发主要由EV71引起的手足口病，4-6月间共29例病人死亡。1998-2001年手足口病在新加坡大量流行。在我国，1981年上海首次报道HFMD；此后，北京、河北、天津、福建、吉林、山东、湖北、青海和广东等十几个省市均有该病的报道。1983年天津爆发了Cox A16引起的手足口病，5-10月间发生了7000余病例；经过2年低水平散发后，1986年再次爆发。1995年武汉病毒研究所从手足口病病人中分离出EV71病毒，1998年深圳市卫生防疫站从患者标本中分离出EV71病毒。1998年台湾爆发了大规模的EV71疫情，发病人数估计达150万，其中重症405例，死亡78例，大多为5岁以下的幼儿。我国2000年80,677人感染HFMD，重症感染者291例，死亡41例；2001年出现389例重症感染者，55人死亡。手足口病已经越来越成为威胁国内儿童健康的广泛流行性疾病之一。2007年至今，该病在我国不断流行；山东临沂、青岛和济南、安徽阜阳等地均发生以EV71为主要病原体导致的手足口病的流行。

HFMD为自限性疾病，在婴幼儿中传播，可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹、溃疡，个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜炎等致死性并发症。EV71与Cox A16是导致HFMD的两种最主要的病原体；其中EV71占HFMD重症病例的90%左右，占死亡病例的80%左右。EV71属于微小核糖核酸病毒科肠道病毒属，为单股正链RNA，含7000多个核苷酸，包括一个开放阅读框，编码VP1-VP4四个病毒结构蛋白。VP1是主要的衣壳蛋白与病毒中和决定因子，具有最多的型特异性中和位点，负责病毒与靶细胞的结合，决定着病毒的抗原性，其基因序列与病毒血清型具有较高的相关性，根据VP1的全基因序列,将EV71分为A、B和C型3个基因型。

目前用于检测EV71病毒的方法主要有RT-PCR法和荧光定量PCR法。上述方法特异性较好，但是灵敏度差，试验容易发生污染出现假阳性和假阴性结果。同时病毒在传播过程中存在一定核苷酸突变的几率，因此引物设计是个问题。同时试验费用高，需要许多大型仪器设备和熟练的技术人员，操作复杂，检测时间长，不易在我国推广使用。

疫苗作为疾病的有效预防手段，其有效性得到了世界公认。EV71常见毒株均为非致死毒株，在体外只能开展血清学检测，单一的检测手段不能够全面的评价疫苗效果，由非致死株作为抗原获得的抗体疫苗的临床效果不明显，制备出的疫苗质量相对较低。有研究报道（Chen等,2004）使用小鼠适应性EV71通过口服、肌肉接种（i.m.）、腹腔接种(i.p.)和脑内接种(i.c.)等方式感染七日龄小鼠可以模拟EV71感染人和猴所产生的急性麻痹（Chen等,2004;Wang等,2004）。与母本病毒相比，小鼠适应性HEV71感染小鼠时毒力更强，表现为产生更大的空斑和更快的病变速度。这种小鼠适应性病毒株的潜在毒力经检定可能与5’非翻译区（4个核苷酸的改变），VP2衣壳蛋白（3个核苷酸和1个氨基酸发生了改变）和非结构蛋白2C（8个核苷酸和4个氨基酸发生了改变）有关（Wang等,2004）。因此致死毒株筛选和致死动物模型的建立对于疫苗评价、传统疫苗的改进和新型疫苗的开发生产具有重要的意义。