[发明专利]一种制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体地说，涉及一种制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法。 

背景技术

山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷属于黄酮类化合物，黄酮类化合物具有很好的药学效果，能降低毛细血管通透性和脆性,促进细胞增生和防止血细胞凝聚,清除自由基，在心脑血管疾病的治疗上起到了举足轻重的作用。同时，研究表明山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷还具有抗肿瘤作用。 

山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷存在于珍珠菜、碟豆花、长春花、乔皮、海芒果、长叶胡颓子、银杏叶等植物中。目前对于山奈酚-3--2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷提取分离，主要是植物经过醇提，然后经大孔树脂或葡聚糖凝胶等多次柱层析步骤进行分离纯化，操作步骤繁琐，过程复杂，同时需要消耗大量的有机溶剂，耗时费力。用二维液相色谱－质谱技术制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法还未见报道。 

二维液相色谱技术是通过用两根性质相同或不同的色谱柱对复杂样品进行分离。作为一种分析复杂样品的理想工具，它已被广泛应用于医药卫生、食品科学、环境和农业科学等各个领域。与单维制备色谱相比，二维液相色谱不但具有更高的峰容量，而且两维具有不同的选择性。经过第一维简化的组分可以在第二维上根据不同的选择性而实现互补分离，结构相似的化合物可能在第二维可到有效分离，从而提高制备的效率和化合物纯度。 

银杏叶为银杏科植物银杏（Ginkgo biloba）的干燥叶，其提取物具有活血化 瘀通络的功效。现在药理研究表明，银杏叶中富含大量黄酮和银杏内酯。我国是银杏资源的古国和大国，全国有20多个省市区大面积种植银杏树，银杏资源占全世界的70%，银杏叶的总产量每年在2×107kg以上，资源极大丰富。 

发明内容

针对上述缺陷，本发明提供一种以银杏叶提取物为原料，采用二维液相色谱－质谱技术制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法。 

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案是： 

一种制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于：步骤如下： 

1）、从中药提取物中制备高纯度山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷； 

2）、将中药提取物溶于甲醇－水溶液，制得中药提取物溶液； 

3）、采用分离纯化技术从中药提取物中制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷。 

2、根据权利要求1所述制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于：所述中药提取物为银杏叶提取物，银杏叶提取物溶于25%－75%的甲醇－水溶液，制得银杏叶提取物溶液，银杏叶提取物浓度为10－1000mg/mL。 

3、根据权利要求1所述制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于：所述分离纯化技术为二维液相色谱－质谱联用进行银杏叶提取物制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷； 

液相色谱进行一维制备的色谱柱为反相C18，反相C8，Click OEG。采用液相色谱进行二维制备的色谱柱为反相C18，反相C8，Click OEG； 

一维液相色谱制备采用的流动相为有机相与水相混合，洗脱条件按照有机 相5－65%等度或0－50分钟有机相由5%提高到70%梯度进行；有机相为甲醇或乙腈，水相为水； 

对保留时间5－25分钟主成分为山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的组分进行收集，旋转蒸发至干，作为一维制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品；将一维制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品用25%－75%的甲醇－水溶液溶解，至浓度为20－200mg/mL； 

对一维收集浓缩后的样品，进行二维液相色谱制备。采用的流动相为有机相与水相混合，洗脱条件按照有机相5－15%等度或经0－30分钟有机相由5%提高到30%梯度进行，二维制备根据质谱选择离子指导组分收集；有机相为甲醇或乙腈，水相为水； 

制备时流动相流速为60－120mL/min，制备时柱温为室温或25－40℃，制备时进样量为200－3000μL/针，检测器为DAD紫外检测器和质谱检测器；制备时流动相最佳流速为80－100mL/min，制备时柱温为室温，制备时进样量为2000－2500μL/针，紫外检测器为360nm；