[发明专利]一种防治鸭呼肠孤病毒病的精制蛋黄抗体复合物及其制备方法

权利要求书

1.一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物，其特征在于它主要由鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体和姬松茸多糖组成。

2.根据权利要求1所述的一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物，其特征在于所述蛋黄抗体与姬松茸多糖干物质的质量比是4:1。

3.一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）蜂胶佐剂灭活苗的制备

a．灭活病毒悬液的制备

用冷冻保存的鸭呼肠孤病毒解冻稀释后接种11日龄SPF番鸭鸭胚，24h死亡后采集鸭胚尿囊液，灭活，然后置低温下冰箱保存备用；

b．蜂胶佐剂的制备

将固体蜂胶1份磨碎溶解于4份乙醇中，置室温下浸渍24h，然后在低温下冷却，2500r/min离心10min，取上清液，即为纯化的蜂胶乙醇浸提液；根据蜂胶的纯度，计算出其中干物质的含量，制成蜂胶佐剂；

c．蜂胶佐剂灭活苗的制备

将步骤a制备的灭活病毒悬液与步骤b制备的蜂胶佐剂按1:1（V/V）混合，搅拌均匀即可；

（2）制备高免鸡蛋

选择健康高产蛋鸡，将步骤（1）制备的蜂胶佐剂灭活苗免疫健康高产蛋鸡，收集免疫后高产蛋鸡的鸡蛋，即为鸭呼肠孤病毒高免鸡蛋；

（3）制备精制蛋黄抗体复合物

a．分离蛋清蛋黄

将上述步骤（2）制备的高免鸡蛋用清水洗净，再用乙醇擦洗，晾干，送入蛋清蛋黄分离机进行蛋黄分离；

b．制备精制蛋黄抗体

取1份步骤（3）-a所分离的蛋黄加2份醋酸缓冲液，用酸调pH至4.8；按每毫升稀释腹水加11μL辛酸的比例，在室温搅拌下逐滴加入辛酸，于30min内加完，低温下静置2h，然后以10000r/min的转速离心30min，弃沉淀；上清液经125μm尼龙筛过滤后，加入1/10体积的0.01mol/l的PBS，用碱调pH至7.2；将40%甲醛溶液与该上清液混合，使甲醛的终浓度达到0.1%（V/V），充分搅拌均匀；

c．制备精制蛋黄抗体复合物

在步骤b所制备的精制蛋黄抗体中加入姬松茸多糖干粉，加入保护剂，分装冻干，检验合格，包装入库即可。

4.根据权利要求3所述的一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于所述低温为4℃。

5.根据权利要求3所述的一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于所述步骤（1）-b中的蜂胶佐剂的浓度为30mg/mL。

6.根据权利要求3所述的一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于所述步骤（1）-b中的乙醇浓度为95%。

7.根据权利要求3所述的一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于所述步骤（3）-a中的乙醇浓度为75%。

8.根据权利要求3所述的一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于所述步骤（3）-b中的醋酸缓冲液为pH是5.0的0.06mol/l醋酸缓冲液。