[发明专利]绛红褐链霉菌SP3菌株及其在红豆杉土传根病和红豆杉促生上的应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及的是一种绛红褐链霉菌SP3菌株及其在红豆杉土传根病和红豆杉促生上的应用。 

背景技术

红豆杉是第四纪冰川孑遗植物，被称为植物王国里的“活化石”，因其资源稀少，被列为世界珍稀树种加以保护。它是我国一级保护珍稀树种，是集药用、观赏、绿化、特种优质用材为一体的珍贵树种，其根、茎、叶可提取加工成全球紧俏的高新技术产品抗癌新药——紫杉醇。其体内提取的紫杉醇是目前世界上最好的抗癌药物之一，在资源植物中具有较突出的地位。由于天然红豆杉资源极其有限，且为国家保护的珍稀树种，所以人工种植红豆杉成为提取紫杉醇的主要来源。此外，红豆杉的树形美丽，果实成熟后红绿相映的颜色搭配令人陶醉，广泛应用于水土保持及园艺观赏林。房前屋后、道路两旁也适宜种植，是改善生态环境和建设秀美山川的优良树种。红豆杉在园林绿化、室内盆景方面也有十分广阔的发展前景。 

红豆杉在生长过程中易发生根腐病，植株最直观的表现就是根茎腐烂。在南方红豆杉上，此病在植株根、茎上都有发生，属于软腐中的根腐和茎腐。地上部份是慢慢失水黄化枯死而不倒伏，也称为立枯。一般表现为霉状物，但在病部很难发现霉状物。主根病斑是水渍状小斑点，表面软腐；侧根发病后褐变 而腐烂。红豆杉根腐病发生后，植物生长缓慢，易死亡，有关这方面研究都还尚少。因此，对于红豆杉根腐病的防治和促生方法也还处于发展探索当中，一般以化学农药、化学肥料为主，但由于长时期施用化学农药（肥料）易污染环境，破坏生态。 

发明内容

本发明的绛红褐链霉菌SP3菌株于2009年7月10日采用采用平板稀释法分离于四川洪雅县红豆杉根际经鉴定为绛红褐链霉菌，经抗菌谱研究，该菌对红豆杉根腐病菌( Pythium sp. )抑菌率达到100%，已经于2012年7月19日保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.6383，分类命名为绛红褐链霉菌Streptomyces purpeofuscus。 

本发明筛选的生防菌绛红褐链霉菌SP3新菌株具有防病、促生双重功能，兼有生物防治和生物肥料特点，对土传病害有特效，不仅能避免化学药物（农药、化肥）所造成的污染环境的严重后果，而且具有可持续、成本低的特点。 

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。 

实施例1 绛红褐链霉菌SP3液体制剂的发酵： 

①一级斜面种子：常规方法制作改良高氏一号斜面培养基（KNO₃1g，KH₂PO₄0.5g，MgSO₄.7H₂O 0.5g， NaCl0.5g，Fe₂(S04)₃.7H₂O  0.01g，可溶性淀粉20g，琼脂17g，水1000ml），接种SP3后在26-28℃下培养48小时制成一级斜面种子。 

②二级液体种子：改良高氏一号培养液[KNO₃1g，KH₂PO₄0.5g，MgSO₄.7H₂O 0.5g， NaCl0.5g，Fe₂(S04)₃.7H₂O  0.01g，可溶性淀粉20g，红豆杉根浸渍液1000ml（制备方法：10克红豆杉根在1000毫升水中煮沸30分钟，保持水量1000毫升，过滤去除根残渣为红豆杉根浸渍液），pH7.2～7.4]经高压灭菌后，按100mL液体盛于300mL三角瓶比例（通氧控制）装瓶，在无菌状态接种SP3斜面种子，每瓶接种2支斜面种子，温度26-28℃，初始pH值6.0，120r/min振荡培养36h，制成SP3二级液体种子。 

③液体发酵：培养液（葡萄糖 5g、甘油 5g、黄豆饼粉 3g、蛋白胨5g、NaCl 2.5g、CaCO₂ 2g、蒸馏水 1000mL）经高压灭菌后，按100mL液体盛于300mL三角瓶比例（通氧控制）装瓶，在无菌状态接种上述SP3二级液体种子，10⁸cfu/mL孢子悬浮液接种量为1%（体积比），温度26-28℃，初始pH值7.0，140r/min振荡培养96h，制成SP3液体制剂。平板法测定SP3对红豆杉根腐病菌( Pythium sp. )抑菌率达到100%以上。