[发明专利]一种偶氮甲酰胺(ADA)的HPLC检测方法

说明书

技术领域

本发明属于食品添加剂的检测领域，是利用高效液相色谱快速、准确地检测面粉改良剂偶氮甲酰胺的方法。

背景技术

偶氮甲酰胺(ADA)作为一种新型面团改良剂，可改善面团的物理操作性质及面制品组织结构，在国外已广泛应用。在面粉熟化处理方面，能够氧化小麦粉中的半胱氨酸，从而使面粉筋度增加，提高面团气体保留量，增加烘焙制品的弹性和韧性，改善面团的可操作性和调理性。由于偶氮甲酰胺属于碱性物质，如果在食品中超量使用，可能会对人体的肠胃和肝脏造成损害。ADA在高温下分解产生气体发泡，同时会生成有毒物质盐酸氨基脲(SEM)。GB2760-2007中规定了ADA在小麦粉中的最大使用量为45mg/kg。

虽然我国已规定偶氮甲酰胺在面粉中的最大使用量，但目前还未见有关于面粉中ADA检测方法的报道，也无相关的检测标准。

发明内容

本发明目的在于提供一种操作简便、分析迅速的ADA的高效液相色谱(HPLC)检测方法。本发明的技术方案如下：

(1)面粉样品预处理

将样品用有机溶剂进行ADA的浸泡萃取，离心，取上清液氮吹浓缩至近干，并用20mM乙酸铵水溶液定容，用0.45μm膜过滤，从而完成样品的前处理；

(2)HPIC条件

选用C₁₈或ODS反相色谱柱，采用光电二极管阵列检测器检测：检测收波长为246nm；流动相体积比：V(CH₃OH)∶V(20mM乙酸铵水溶液)＝15∶85等度洗脱；流速：v＝0.8mL/min；

(3)ADA高效液相色谱检测标准曲线的绘制

准确称取ADA0.05g，用N，N-二甲基甲酰胺(DMF)定溶于50mL棕色容量瓶中，配制成1000mg/LADA储备液，用水分别稀释成浓度分别为2、5、10、20、30、40mg/L的标准系列溶液，按照方案(2)的条件进行测定，以ADA浓度为横坐标，特征峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，用于分析样品中ADA的含量；

(4)样品的测定

根据方案(1)中样品预处理后，按方案(2)中检测条件进行检测，并利用方案(3)中得到的标准曲线计算样品中ADA含量。

本发明的优点与有益效果是：采用本发明的HPLC法检测面粉中ADA，并使用光电二极管阵列检测器，可以根据扫描光谱对目标物进行进一步定性，方便快捷，灵敏度高，检测限低，有利于ADA的快速检测，可用于大规模样品检测，适于标准化。

附图说明

图1为ADA标准品的HPLC图谱；Hypersil ODS2色谱柱(5μm×4.6mm×150mm)，光电二极管阵列紫外检测器，吸收波长为246nm，流动相体积比CH₃OH∶20mM乙酸铵水溶液为15∶85等度洗脱，流速0.8mL/min)

图2为ADA的标准曲线，横坐标为ADA浓度，纵坐标为ADA色谱峰峰面积。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明并不仅仅局限于下述实施例。

实施例1

准确称取ADA 0.0500g，用DMF定溶于50mL棕色容量瓶中，配制成1000mg/L的ADA储备液，置于4℃冰箱中保存。取一定量的1000mg/mL的ADA标准储备液，用去离子水稀释成浓度分别为2、5、10、20、30、40mg/L的标准系列溶液，利用HPLC进行测定，检测波长为246nm，以峰面积(Y)对浓度X(mg/L)进行线性回归，绘制标准曲线(图2)，得标准曲线函数关系为：Y＝113967X-24180，相关系数为R²＝0.9996，线性良好，可用于定量样品中ADA的含量。

实施例2

选取配料表中表明添加ADA的面粉样品，准确称取面粉1g(精确到0.0001g)于50mL离心管中，加入10mL丙酮，涡旋均匀，震荡旋转20min，离心，取上清液氮吹至近干，用2mL20mM乙酸铵水溶液定容。浓缩液过0.45μm一次性微孔滤膜，滤液注入HPLC分析。

对面粉做三个平行样品，结果见表1。对平行样1重复测定6次，分析结果见表2。通过分析知，平行样品的相对标准偏差(RSD)为2.44，重复测定实验的相对标准偏差为2.17％，重复性较好。

表1面粉样品中ADA的含量

表2平行样1重复测定结果

实施例3