[发明专利]新的抑癌基因UNC5D及其编码蛋白的新应用

说明书

技术领域

本发明涉及一个新的潜在抑癌基因及其编码蛋白的新应用，具体地说，本发明涉及UNC5D作为一个新的潜在抑癌基因及其编码蛋白的应用。

背景技术

UNC5D属于UNC5受体家族成员。UNC5受体家族在1997年被报到是神经生长因子netrin-1的受体，该家族中除UNC5D外，其它成员还包括UNC5A、UNC5B、UNC5C。而UNC5D在UNC5家族中是发现最晚的。Netrin-1及其受体最初是被发现在神经经系统发育中起重要作用，因其能够调控神经纤维的定向迁移。近年来，Netrin-1及其受体在肿瘤发生中的作用越来越受到重视。Netrin-1及UNC5家族中的UNC5A、UNC5B和UNC5C在肿瘤发生发展中的作用都相继有了报道。目前关于UNC5D基因的肿瘤生物学功能仍未有任何报道。

发明内容

本发明的一个目的在于研究UNC5D在肿瘤特别是肾癌中的表达特点和其表达调控的机制、研究UNC5D的新功能并提供UNC5D的新应用。

在本发明中，所述UNC5D包括UNC5D基因或UNC5D蛋白等。所述UNC5D蛋白为如SEQ ID No.2所示氨基酸序列组成的蛋白，或在SEQ ID No.2所示氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且与SEQ ID No.2所示氨基酸序列组成的蛋白具有相同功能的衍生蛋白。所述UNC5D基因为编码本发明的UNC5D蛋白的多核苷酸序列，优选为编码SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多核苷酸序列，或者除了上述氨基酸序列的编码序列之外，还可以包括非编码序列，例如内含子、编码序列5′或3′端的非编码序列等。其中优选的UNC5D基因为SEQ ID No.1所示的多核苷酸序列，其为在GenBank的登记号为NM 080872.2的基因。或者，更优选的UNC5D基因为一种分离的核苷酸序列，其只包含编码UNC5D蛋白序列，例如SEQ ID No.1所示的编码序列：第329～3190位核苷酸序列。本领域普通技术人员已知，本发明的UNC5D基因的核苷酸序列可以完全相同于如SEQ ID NO：1所示的编码序列，也可以由于遗传密码的简并性，不完全等同于上述核苷酸的编码序列。

本发明研究了UNC5D在人类多种正常组织中的表达情况，及在多种组织来源的肿瘤细胞系、配对的肾癌和癌旁组织中的表达特点，发现UNC5D在多种组织来源的肿瘤细胞系中表达下调或缺失，其在肾癌组织中的表达明显低于癌旁组织。本发明还进一步通过免疫组化实验，证实UNC5D蛋白在肾癌组织中表达下调。

本发明通过分析临床信息资料，发现UNC5D在肾癌组织中的表达下调程度与肾癌的Fuhrman分级呈相关性。

本发明进一步揭示了UNC5D表达下调的机制，发现染色体上的杂合性缺失(LOH)及UNC5D基因启动子区CpG岛的甲基化是导致UNC5D在多种肿瘤细胞系及肾癌组织中表达下调的重要机制。

本发明通过实验证实：在UNC5D表达下调或缺失的肾癌细胞系(786-O及A498)中恢复UNC5D的表达，可抑制肿瘤细胞增殖、细胞迁移和肿瘤细胞的克隆形成率。通过分析肾癌细胞系786-O表达UNC5D前后细胞周期的变化，发现UNC5D抑制细胞增殖是通过减缓G2/M的释放实现的。

本发明通过在人胚肾细胞(HEK293T)中过表达UNC5D发现，UNC5D 可以诱导HEK293T的凋亡，通过western b1ot证实UNC5D所诱导的凋亡是caspase依赖的。

根据以上结果，可认为UNC5D是一个抑癌基因，并可作为癌症的临床诊断和/或预后判断的辅助指标，而且UNC5D基因或UNC5D蛋白在治疗和/或抑制肿瘤中具有重要应用价值。

根据本发明的实验研究发现，本发明提供了UNC5D基因或其编码的蛋白(UNC5D蛋白)在制备治疗癌症的药物中的应用。可将本发明的UNC5D序列利用任何已知的转导、转化或转染的方法施用于患病个体的肿瘤部位，在UNC5D表达下调或缺失的肿瘤细胞系及癌组织中恢复UNC5D的表达，通过抑制细胞周期进程从而抑制细胞生长，抑制肿瘤细胞增殖、细胞迁移或肿瘤细胞的克隆形成率，可以用于治疗癌症。