[发明专利]一种提取分离玄参波利苷A的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然植物有效成分提取分离领域，涉及一种玄参波利苷A的方法，特别涉及一种利用动态逆流提取、大孔树脂吸附和高速逆流色谱纯化技术相结合的方法提取分离玄参波利苷A的方法。

背景技术

玄参波利苷A（Scropolioside A）是一种环烯醚萜苷类化合物，主要从玄参科植物凯氏玄参或斯科波利玄参中分离得到。药理研究表明，玄参波利苷A具有抗肝毒活性，在口服6mg/kg时，对大鼠硫乙酰胺肝中毒的生化指标保护率分别为：GOT25.74%、GPT45.29%、ACP44.32%、ALP79.82%和GIDH73.63%。玄参波利苷A分子式为C₃₅H₄₄O₂₈，分子量为752.72，结构式为：

。

李宗友报道了凯氏玄参中环烯醚萜苷类成分的分离方法，采用90%乙醇室温渗滤提取，提取液水浴上减压浓缩，粗提取物经液液分配柱层析等方法得到环烯醚萜苷单体成分。该方法操作繁琐、所得产品含量较低、提率低。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术中存在的问题，提供一种玄参波利苷A的制备方法，应用高速逆流色谱分离纯化玄参波利苷A，操作简单、样品损失少、产品纯度高。

为达到上述目的，本发明采用下列技术方案：

（1）提取：以凯氏玄参为原料，粉碎，置于液体动态连续逆流提取装置中，以65-80%的食用乙醇溶液为提取溶剂，提取2-3次，合并提取液；

（2）柱层析：将上述提取液旋转浓缩，浓缩液加水分散，过滤，滤液上大孔树脂，先用水洗脱，再用4-6BV55%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液；

（3）高速逆流色谱分离：将步骤（2）所得乙醇洗脱液浓缩、干燥，干燥物采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，制备得到玄参波利苷A。

所述步骤（1）中液体动态连续逆流装置为多个提取装置串联或并联或串并联合用，每次提取乙醇溶液用量为原料质量的3-5倍（v/w）。

所述步骤（3）中高速逆流色谱法分离溶剂系统选用正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水，体积比为（15-17）：（12-14）：（20-25）：（3-7），溶剂系统配制后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，流动相流速控制在1.5-4.0ml/min，主机转速控制在800-950r/min。

本发明的有益效果是：

1、采用液体动态连续逆流提取技术，通过循环的提取液不断地将有效成分提取出来，缩短了提取周期和溶剂的用量；

2、将大孔树脂和高速逆流色谱技术结合，分离制备玄参波利苷A，工艺简单、质量稳定、产品纯度高。

具体实施方式：

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

实施例1：

将凯氏玄参地上部分低温干燥、粉碎，取5kg，平均置于3个串联的提取装置中，加入20L70%的乙醇溶液，在50℃的提取温度下，提取2次，每次2.5h，合并提取液，过滤后得到提取液，旋转浓缩，加水分散，过滤，滤液通过AB-8型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用5BV的55%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到玄参波利苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为16:13:25:7配制正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统，溶剂系统混匀后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至820r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在2.5ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到玄参波利苷A，含量96.4%。

实施例2：