[发明专利]乳浆大戟提取物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种乳浆大戟提取物及其制备方法和应用。

背景技术

乳浆大戟，属于大戟科，拉丁名为Euphorbia esula Linn.，野生于山坡或路旁，在我国华东、东北到西南各省区都有分布。

乳浆大戟是一种有毒多年生草本植物，形态特征如下：高15-40厘米；有白色乳液；茎直立，下部带淡紫色；短枝或营养校上的叶密生，线状倒披针形；长枝或生花的茎上的叶互生，倒披针形或线状披针形，长1-3．5厘米，宽0．2-0．8厘米，顶端钝、微凹或有细凸尖；多歧聚伞花序顶生，通常3-5枝呈伞状，每伞梗再2-3回叉状分枝；总苞片对生，半圆形，顶端短尖；杯状总苞顶4裂，腺体4，位于裂片之间，新月形，两端有短角；蒴果无毛；种子灰褐色或有棕色斑点，长约2毫米。

在临床上，内用乳浆大戟可治疗四肢浮肿、小便不利、肠炎、疟疾、慢性气管炎等，外用乳浆大戟可治颈淋巴结结核、疮癣、瘙痒等，尚无其它临床应用的报道。

宫颈癌是第二常见的妇科恶性肿瘤。在2002年全球癌症统计中，约有273000人死于宫颈癌，是全球死亡率的一个主要因素。在女性恶性肿瘤中宫颈癌占15％，其中83％发生在发展中国家。预防、诊断和治疗宫颈癌成了维护妇女健康的首要问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种乳浆大戟提取物及其制备方法和应用。

本发明提供的乳浆大戟提取物，是用有机溶剂提取乳浆大戟得到的。

所述有机溶剂具体可为乙醇或乙醇溶液。所述乙醇溶液具体可为乙醇水溶液，如95%（体积百分含量）乙醇水溶液。

所述提取的方法具体可为浸提，为了提高有机溶剂的效率，浸提过程中同时进行溶剂回流。

为了增加提取效率，提取前可将乳浆大戟进行烘干和粉碎。

所述乳浆大戟可为全植株，也可为根、茎或叶。

所述提取的方法具体可为将100.0g乳浆大戟干粉加入500mL 95%（体积百分含量）乙醇水溶液，室温条件下浸提24小时（为了有效利用溶剂，浸提过程中同时进行溶剂回流）。

为了增加有效成分的浓度，在进行所述提取后，可将整个体系进行浓缩。现有的浓缩方法均可采用，如旋转蒸发。

以上任一所述乳浆大戟提取物在制备产品中的应用也属于本发明的保护范围。所述产品的功能为如下（1）至（5）中的至少一种：（1）抑制肿瘤细胞的增殖和/或生长；（2）抑制肿瘤细胞的克隆形成能力；（3）促进肿瘤细胞凋亡；（4）将肿瘤细胞的发育周期抑制在G0/G1期；（5）治疗癌症。所述（1）和/或（2）和/或（3）和/或（4）中，所述肿瘤细胞可为宫颈癌细胞。所述（5）中，所述癌症可为宫颈癌。

本发明还保护一种产品，它的活性成分为以上任一所述的乳浆大戟提取物。所述产品的功能为如下（1）至（5）中的至少一种：（1）抑制肿瘤细胞的增殖和/或生长；（2）抑制肿瘤细胞的克隆形成能力；（3）促进肿瘤细胞凋亡；（4）将肿瘤细胞的发育周期抑制在G0/G1期；（5）治疗癌症。所述（1）和/或（2）和/或（3）和/或（4）中，所述肿瘤细胞可为宫颈癌细胞。所述（5）中，所述癌症可为宫颈癌。

以上任一所述宫颈癌细胞可为HeLa细胞或caski细胞。以上任一所述宫颈癌具体可为HeLa细胞和/或caski细胞引起的宫颈癌。

以上任一所述“将肿瘤细胞的发育周期抑制在G0/G1期”是通过降低细胞中的细胞周期蛋白Cyclin E和周期依赖性激酶CDK4的表达水平，同时升高P21蛋白的表达水平引起的。

本发明的发明人发现乳浆大戟提取物能显著以时间和剂量依赖的方式抑制宫颈癌细胞的生长和增殖，能使宫颈癌细胞的线粒体膜电位显著降低、诱导细胞发生凋亡性细胞死亡，能显著阻滞宫颈癌细胞停留在G0/G1期、降低cyclinD1、cyclinE和CDK4的表达水平，增加P21的表达水平。本发明为开发乳浆大戟的药用价值开辟了新的途径，对宫颈癌的治疗具有重要价值。

附图说明

图1为MTT增殖抑制实验的结果。

图2为细胞克隆形成实验的结果；A：空白对照；B：乳浆大戟提取物浓度为1μg/mL；C：乳浆大戟提取物浓度为2μg/mL；D：乳浆大戟提取物浓度为4μg/mL；E：乳浆大戟提取物浓度为8μg/mL；F：乳浆大戟提取物浓度为16μg/mL。

图3为Annexin V-PI双染细胞凋亡率分析的结果；A：空白对照；B：乳浆大戟提取物浓度为2μg/mL；C：乳浆大戟提取物浓度为8μg/mL；D：乳浆大戟提取物浓度为16μg/mL。