[发明专利]胡桃醌在制备治疗自身免疫及炎症性疾病药物方面的应用

说明书

技术领域

本发明属于中药应用技术领域，涉及中药单体胡桃醌（Juglone）在制备作为治疗自身免疫性疾病、神经系统炎症性疾病药物方面应用。

背景技术

核桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)为胡桃科胡桃属落叶乔木，为珍贵的用材树种和重要的药源植物。胡桃醌（Juglone；Nucin）又名5-羟基-1，4-萘醌；5-羟基-1，4-萘二酮。是从胡桃楸新鲜根皮、枝皮、青果皮中分离出来的羟基萘醌类化合物，是胡桃揪中主要的活性物质。胡桃揪皮为收敛药，对细菌性痢疾，骨结核等有一定疗效。近年来大量研究显示，胡桃醌有抗真菌、抗衣原体或HIV病毒、降血糖和杀虫等生物活性，而且具有抗肿瘤作用，其在对肝癌、肺癌、黑色素瘤、小鼠自发性胃癌等多种肿瘤细胞株有抑制作用，越来越被人们所重视。但是胡桃醌对自身免疫性疾病、神经系统炎症性疾病的影响尚未报道。因此，进一步开发胡桃醌免疫调节和抗炎症活性，有着非常重要的应用前景。

多发性硬化（Multiple Sclerosis，MS）是以中枢神经系统白质脱髓鞘病变为特点,好发于青壮年,发病年龄多在20～40岁，具有高致残率、高复发性的特点,部分患者病情呈进行性加重。因多发性硬化症会侵犯神经纤维的髓鞘、故临床症状端看受损神经纤维为何而决定。一般而言运动、感觉以及视觉的影响都很常见；若脑干及小脑系统的神经纤维受损、复视、吞咽困难、步履不稳、晕眩的症状亦可能发生。如果脊髓发炎、除了运动、感觉功能外、排泄的功能亦发生障碍。少数病患还会有癫痫及智能障碍的发生。迄今尚无肯定有效的治愈办法。实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE，experimental autoimmune encephalomyelitis）是多发性硬化（MS）的成熟动物模型，因其可模拟多发性硬化的病理发生和临床表现而被广泛应用。实验室常用致敏原多为脑或脊髓组织匀浆、髓鞘碱性蛋白成分或其多肽片段等，免疫对象多为啮齿类动物来构建EAE模型，不同的致敏原可产生发病症状不同的EAE模型，可根据其要建立的EAE模型的类型选择不同的致敏原及不同的被免疫对象。本实验选用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）作为抗原免疫C57BL/6小鼠制作MOG35-55-EAE小鼠模型。本实验中用到的髓鞘少突胶质细胞糖蛋白虽然在髓鞘蛋白中含量很少，只占髓鞘蛋白成分的0.01%-0.05%，但由于MOG存在于髓鞘膜和少突胶质细胞的最外层，具有高度免疫原性，且在构建EAE过程中发现，MOG是唯一能引起脱髓鞘抗体反应又能引起T细胞反应的中枢神经系统髓鞘蛋白成分。因此，用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白去免疫小鼠可以建立发病机理及其临床症状同MS极其相似的EAE模型。

目前，EAE/MS的病理发生机制还没有被完全了解，但是普遍认为EAE是由辅助性T细胞（TH1和TH17）介导的自身免疫性炎症引起的中枢神经系统炎症性疾病，不同的辅助性T细胞的定向分化取决于树突状细胞来源的不同抗原信号刺激。树突状细胞是专职抗原提呈细胞，其主要功能是摄取、加工处理和提呈抗原，启动特异性免疫应答。成熟树突状细胞表面特征性标志位CD1a、CD11c和CD83，可高表达MHCⅡ/Ⅰ类分子（人的MHC称为HLA）和共刺激分子（如CD80， CD86，其摄取、加工处理抗原能力弱，而提呈抗原、启动免疫应答能力强。树突状细胞能诱导初始T细胞活化，因此是机体特异性免疫应答的始动者。我们通过监测树突状细胞表面标记物CD83，CD86以及HLA-DR的表达来研究胡桃醌是否影响树突状细胞的成熟及功能。T细胞是免疫细胞中的较大群体，分为不同亚群（如CD4阳性和CD8阳性两大群体）。CD4阳性初始T细胞通过来源于树突状细胞的不同信号（如不同细胞因子）刺激，进而又定向分化为不同的T细胞亚型来行使不同的免疫功能。CD4阳性T细胞又分为辅助性T细胞和调节性T细胞。辅助性T细胞分为TH1，TH2，TH17三大群体。TH1由IL-12或IFN-γ刺激CD4阳性初始T细胞，通过转录因子T-bet分化而来，TH1细胞分泌IFN-γ，可介导细胞免疫起始以及炎症反应。研究显示IFN-γ体内失衡可导致自身免疫性疾病的发生；TH2细胞由IL-4刺激CD4阳性初始T细胞细胞，通过转录因子GATA-3分化而来，在机体中其主要通过分泌IL-4﹑IL-10等抗炎因子来抑制炎性反应；TH17由TGF-β、IL-23及IL-6刺激CD4阳性初始T细胞，通过转录因子RORγt分化而来，TH17细胞分泌IL-17A，可介导炎症反应。因此,抑制炎性因子的释放和促进抗炎因子的分泌成为治疗自身免疫性疾病的方向之一。

发明内容