[发明专利]突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖及其制备方法

权利要求书

1.枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖，由培养的保藏号为CCTCC NO：M2011208的枯草芽孢杆菌突变株ZN0871v11经细胞破碎后，将破碎所得物质去除蛋白质、磷壁酸和脂类而得。

2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖的提取工艺，其特征在于将培养的枯草芽孢杆菌突变株ZN0871v11经细胞破碎后，将破碎所得物质去除蛋白质、磷壁酸和脂类而得到，具体包括以下步骤：

（1）、菌种培养：将突变株ZN0871 v11以1%的接种量接种到液体培养基中活化，然后将活化后的突变株ZN0871 v11细胞转接到新鲜的液体培养基中培养30～36 小时；

（2）、离心：将步骤（1）中培养完成所得的菌液在10000～12000 rpm/min，4～10 ℃环境下离心2～5分钟，弃上清收集沉淀得沉淀A，沉淀A加无菌水洗涤后离心收集沉淀得沉淀B；

（3）、破碎细胞壁：在沉淀B中加入缓冲液A后微波加热至80℃以上后自然冷却，然后置于冰浴中用超声波破碎仪处理，直至其内无完整的细胞，然后在12000～13000 rpm/min，4℃环境下离心10分钟，弃上清收集沉淀；再在沉淀中按0.1～1 g沉淀/10 mL乙醚的比例加入无水乙醚以抽提脂类物质，搅拌均匀后在室温下放置30～60 min，然后在12000 rpm/min，4～10 ℃条件下离心10分钟后收集沉淀，在收集到的沉淀中按每0.05～1 g沉淀量加入10 mL无水乙醇，然后在12000 rpm/min，4～10 ℃条件下离心10分钟后收集沉淀，再在沉淀中按每0.05～1 g沉淀量加入0.5～1 mL蒸馏水使沉淀重悬并离心以洗出残留的乙醇，洗涤重复2次以上，最后一次洗涤后离心收集沉淀得沉淀C；

（4）、蛋白酶解：在沉淀C中加入缓冲液B将细胞碎片沉淀重悬，除去细胞中DNA和RNA，然后按每毫升溶液中加入10～15 μL浓度为10 mg/mL蛋白酶溶液并混合均匀，再放置于恒温水浴中保温8小时以上；然后在12000～13000 rpm/min，4 ℃条件下离心8～10分钟后弃上清收集沉淀，得沉淀D；将沉淀D用缓冲液C洗涤2～3次后，再在沉淀D中加入浓度为10%的TCA溶液，并将温度调节至20～37℃保温18～24 h，最后将重悬后的液体在12000～13000 rpm/min、4 ℃条件下离心8～10分钟后弃上清、收集沉淀，制得枯草芽孢杆菌突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖。

3.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖的提取工艺，其特征在于：步骤（1）中液体培养基为液体LB培养基。

4.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖的提取工艺，其特征在于：步骤（3）中缓冲液A为50 mM Tris-HCl,pH7.0，微波加热的时间为2～5 min，加热分段进行，每段加热时间为30 s，且段与段加热之间间隔10 s；加蒸馏水洗涤步骤重复3次。

5.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖的提取工艺，其特征在于：步骤（4）中缓冲液B为50 mM Tris-HCl,pH8.0～8.5，缓冲液C为50 mM Tris-HCl,pH7.8～8.3；所述的除去细胞中DNA和RNA的具体方法为在沉淀C中加入DNase和RNase降解DNA和RNA；所述的蛋白酶为蛋白酶P16。

6.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖的用途，其特征在于：将枯草芽孢杆菌突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖作为絮凝剂和/或吸附剂直接用于快速处理pH2.5～7.0的有机工业废水。

7.根据权利要求6所述的突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖的用途，其特征在于：所述的突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖在金属离子Fe²⁺的存在下对有机工业废水直接进行快速处理。