[发明专利]仅鼻拟人吸烟大鼠免疫功能评价指标的筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学评价指标筛选领域，具体涉及一种仅鼻拟人吸烟大鼠免疫功能评价指标的筛选方法。

背景技术

卷烟烟气是一种复杂的混合物，它含有6000多种化学物质，卷烟燃烧是一个非常复杂的物理化学过程，由于烟草组分的热分解和燃烧等反应会生成大量化学物质，其中有CO、自由基、多环芳烃(PAHs)、杂环化合物、醌类、酚类、醛类、酮类、酸类、酯类、脂肪族化合物等有机成分，还包含有痕量的无机元素如Fe、Cu、Cr、Cd、Zn等。而高浓度的自由基以及可与其他物质反应而生成活性物质的化学成分如CO、醛类及多环芳烃类等活性物质可损伤细胞，攻击DNA，形成共价的DNA加合物，引起DNA碱基错配，DNA单链或双链断裂，导致DNA损伤，从而引起机体各种机能的变化。

因此吸烟是一个主要的健康风险因素，会增加包括呼吸道感染、慢性阻塞性肺炎、肺癌、心脏病等各种疾病的发病率(Talhout R，Schulz T，Florek E，et al.Hazardous compounds in tobacco smoke.Int J Environ Res Public Health.2011，8(2)：613-28.)。卷烟点燃时所释放的焦油和一氧化碳等化学物质，可以刺激呼吸道，损伤血管内膜，降低红血球输氧能力，增加心脑血管疾病的发病率和死亡率，促进癌症的发生。吸烟是一种损伤和促炎反应，及免疫抑制因素(Patel RR，Ryu JH，Vassallo R.Cigarette smoking and diffuse lung disease.Drugs 2008；68：1511-1527；Kim V，Rogers TJ，Criner GJ.New concepts in the pathobiology of chronic obstructive pulmonary disease.Proc Am Thorac Soc 2008；5：478-485.)，有证据显示烟草烟雾会破坏呼吸道上皮的屏障功能，巨噬细胞功能被抑制，淋巴细胞凋亡增加，炎症局部淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润增加，毒性T淋巴细胞比例增加(Tc)，炎性细胞因子分泌活跃(包括IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α)，最终影响机体的天然和获得性免疫功能(Domagala-Kulawik J.Effects of cigarette smoke on the lung and systemic immunity.J Physiol Pharmacol.2008，59Suppl6：19-34.)。其中，IL-6是由激活的T(Th₂)细胞、B细胞、单核-巨噬细胞、纤维母细胞、内皮细胞以及某些肿瘤细胞所分泌的致炎因子，在炎症和急相性反应中起重要作用。

这些免疫功能的改变与烟草中大量有害成分含量密切相关。焦油是卷烟烟气中主要的有害物质，由多种烃及烃的氧化物、硫化物和氮化物等复杂化合物组成。焦油进入生物活体后，引起细胞中如DNA、RNA、蛋白质的损伤，从而干扰细胞正常机能。体外研究显示焦油含量越高，对细胞的毒性作用也越强。体内研究中，高焦油和低焦油香烟对机体的免疫损伤是否存在差异，这种差异与哪些因素相关，目前尚不清楚，也没有相应的报道。

烟草对人体健康的不利影响已在全世界被广泛报道，寻找稳定敏感的免疫监测指标对监测保护人群健康至关重要，监测有害物质含量与免疫功能变化的相关性对于减少和控制吸烟引起的相关疾病具有重要意义，但目前尚缺乏敏感稳定的免疫评价指标。因此，研究免疫功能评价指标，筛选出敏感稳定的免疫评价指标对科学降低卷烟的危害性具有重大的意义。

发明内容

本发明提供了一种仅鼻拟人吸烟大鼠免疫功能评价指标的筛选方法，筛选结果比较科学全面。

一种仅鼻拟人吸烟大鼠免疫功能评价指标的筛选方法，包括以下步骤：

(1)以吸空气大鼠的血清、脾淋巴细胞、脾淋巴细胞培养上清液、腹腔巨噬细胞及血液作为正常对照组，经鼻连续抽吸卷烟的大鼠的血清、脾淋巴细胞、脾淋巴细胞培养上清液、腹腔巨噬细胞及血液作为吸烟组；

(2)利用MTT增殖法检测步骤(1)中各组脾淋巴细胞增殖能力，比较各组检测结果，分析相互的显著性差异情况，若吸烟组与正常对照组相比有显著性差异，筛选出该指标作为评价指标，反之，放弃；

(3)利用鸡红细胞吞噬实验法检测步骤(1)中各组腹腔巨噬细胞吞噬百分比(即吞噬百分率)和吞噬指数，比较各组检测结果，分析相互的显著性差异情况，若吸烟组与正常对照组相比有显著性差异，筛选出该指标作为评价指标，反之，放弃；