[发明专利]柚皮素在制备治疗肺炎药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及柚皮素在制备治疗肺炎药物中的应用，属于医药领域。

一、背景技术

柚皮素(naringenin，Nar，4，5，7一三羟黄烷酮)是从芸香科植物柚中提取出的一种单体，属于黄酮类化合物，它广泛存在于柠檬、葡萄汁、橘子等中，具有较强的清除自由基、抗氧化、抗炎、抗动脉粥样硬化、抗纤维化、细胞保护作用，以及抗菌、消炎、抗肿瘤等多种药理作用，但目前尚未作为药物应用于临床。

细菌性肺炎是由肺炎链球菌(即肺炎球菌)、金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、肺炎克雷白杆菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌、埃希大肠杆菌、绿脓杆菌等感染所引起的疾病。近年来，金黄色葡萄球菌耐药性日益严重，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)，对大部分抗生素都有耐药性。临床上由金黄色葡萄球菌感染的肺炎发病率和死亡率依然很高，传统抗生素在治疗耐药性金黄色葡萄球菌引起的肺炎效果也在逐渐降低。因此，临床上金黄色葡萄球菌感染可能会面临无药可治的局面，寻找到切实有效的新型抗菌药物已成为迫切的需要。本发明研究从金黄色葡萄球菌的主要毒力因子α溶血素入手，证实了柚皮素通过抑制α溶血素分泌从而治疗细菌性肺炎，尤其是耐药性金黄色葡萄球菌引起的肺炎具有较好的治疗效果。

二、发明内容

柚皮素的分子结构如下：

本发明通过兔红细胞溶血试验、人肺上皮细胞(A549)损伤的保护试验以及小鼠金葡菌肺炎模型证实其治疗金葡菌感染作用。

三、具体实施方式

1.溶血试验

金黄色葡萄球菌培养再与不同浓度的柚皮素共同培养到对数生长后期，收获菌液离心取上清。将不同药物浓度培养上清分别与稀释的兔脱纤维红细胞混合，于37℃共孵育10-20分钟。离心测量上清的吸光值。

加入不同浓度的柚皮素后溶血百分比如下表1：

表1.ATCC 29213、ATCC 10832、8325-4和BAA-1717在不处理和加入不同浓度的柚皮素的培养物的上清溶血作用

^a药物未处理组的金黄色葡萄球菌培养物上清对兔红细胞的溶血作用设定为100％溶血：none表示为观察到溶血作用；

各药物处理组与未处理组进行t检验分析差异性(*表示差异显著P＜0.05；**表示差异极显著)。

2.人肺上皮细胞(A549)损伤的保护试验

金葡菌NCTC 8325-4于TSB培养基中培养至取5ml的细菌培养物，离心并重悬于10ml的F12K培养基中。A549细胞用含10％胎牛血清F12K培养，以1.5×10¹个细胞/孔铺于96孔板中，37℃、5％CO₂培养24小时。细胞贴壁后，加入100μl金葡菌悬液，并加入不同浓度的柚皮素，置于细胞培养箱中于37℃、5％CO₂共培养8h。加入live(greed)/dead(red)试剂，后于激光共聚焦显微镜(LSCM)下观察A549细胞的状态，活细胞显绿色，死细胞显红色。

结果表明，柚皮素能够保护金葡菌α-溶血素介导的人肺上皮细胞(A549)损伤，该作用呈现剂量依赖性。

3.小鼠金葡菌肺炎的实验治疗学研究

3.1小鼠金葡菌肺炎模型

C57BL/6J小鼠(雄性，18-22g)经乙醚麻醉后，滴鼻30μl金葡菌悬液(金葡菌8325-4)，小鼠平躺直至苏醒，建立小鼠金葡菌肺炎的模型。致死试验给予4×10⁸CFUs的金葡菌，而组织病理学考察给与2×10⁸CFUs的金葡菌。

3.2保护率试验

小鼠接种金葡菌后2h分别皮下注射100、50和25mg/kg(100μl)的柚皮素，每6h给药一次。不给药对照组给予100μl的生理盐水，每组30只小鼠。按给药方案给药后，分别记录小鼠感染金葡菌24h、48h、72h后的死亡率。

结果表明，经柚皮素处理后，显著降低小鼠金葡菌肺炎的死亡率(P＜0.05)。如表2.

表2.柚皮素对小鼠金葡菌肺炎死亡率的影响