[发明专利]肺结核中医证候分型特征蛋白的质谱模型及其制备

说明书

技术领域

本发明属于质谱检测技术领域。一种通过能与蛋白质结合的磁珠基质去捕获生物标志，并用有定量控制的质谱分析来检测肺结核中医证候生物标志。在此提及的此项发明涉及蛋白质检测领域，为一种新的非侵入性的体外质谱检测方法。本发明可以应用到已经脱离人体的血清中的肺结核中医证候生物标志组合的检测方法或试剂盒。

背景技术

肺结核病是由结核分枝杆菌感染肺部引起的慢性传染病，中医称为“肺痨”、“痨瘵。中西医结合治疗耐药肺结核和疑难重症肺结核具有独特的优势（刘艳科等，中医药治疗肺结核的现状及展望，中医药导报，2010）。中西医结合治疗肺结核通过应用西药直接杀灭结核菌和中医调理相结合，达到抗痨,促进病灶吸收,空洞闭合,提高机体免疫力的疗效。通过“辩证”中医将肺结核分为“肺阴虚、“阴虚火旺”、“气阴两虚”等不同证候，然后依据“补虚培元，抗痨杀虫”的治疗原则，针对各种证候分别有“滋阴润肺”、“滋阴降火”、“滋阴补阳”、“益气养阴”等相应的对证治疗措施，并随着证候的变化与病程的转归，调整方剂，提高疗效。

但由于中医治疗肺结核技术存在的辨证标准化问题，严重限制了中医治疗肺结核的临床应用。中医诊断治疗的精髓是“辨证施治”，正确辨证是正确治疗的必要前提。目前临床上对肺结核辩证标准不一，肺结核证候的表述、分型方法仍比较混乱，主观随机性较大。即使采用同一种证候分型方法，证候的拿捏把握依赖临证者个人的学识、经验和悟性，不可避免的影响辨证的准确性、可靠性和可重复性，严重影响临床治疗效果。若不能将证候标准统一，辨证依据科学量化，将严重限制中医治疗肺结核的临床应用。解决辩证标准量化问题的途径，除了运用统计学、信息学和循证医学等交叉学科的标准化尝试，更深层次的应从证候的生物学本质依据着手，在此基础上发展能体现证候生物学本质的新型现代诊断技术来辅助中医诊疗，最终形成规范化、标准化和量化的中医辨证施治技术，这是当前中医证候研究的发展趋势。

证候是生命活动异常的表现特征，证候及其变化的宏观表现对应着生命体内复杂的微观分子的变化。其中尤为重要的是生命活动的主要功能载体-蛋白质。如采用双向电泳（2D）技术，部分“肾虚证”和“脾虚证”等中医证候对应的标志性蛋白已相继被鉴定出来。相对于敏感性较差，蛋白质信息涵盖度较低的2D技术，表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术（SELDI-TOF-MS，Surface Enhanced Laser Desorption Ionization-Time of Flight-Mass Spectrometry）技术已成为重要的蛋白质组学质谱研究技术。纳米磁珠结合SELDI-TOF-MS技术进一步提高了质谱检测的灵敏性和稳定性。SELDI-TOF-MS技术不同于只能针对单一指标进行分析的传统检验技术，通过对蛋白质动态、全景的分析，探索疾病不同阶段最微小的指标和征兆，可以将患者的血清蛋白质成分的变化记录下来，显示血清中各种蛋白的分子量、含量等丰富信息，既着重宏观整体，又注意局部微观变化，其指导思想和研究方法与中医“宏观层次上的微观辨证”相符，也符合中医辨证“整体性”、“时点性”、“动态性”和“趋向性”的特点。将其用于中医证候研究，对传统中医证候分型技术的标准量化可起到良好的辅助作用。通过比较不同证候血清蛋白质的差异，可以发现各证候之间对应的特定血清蛋白质表达差异，并以此作为证候分型诊断的生物学依据（何磊等，基于血清蛋白组学的慢性肾衰中医不同证型的研究，辽宁中医杂志，2010）。但国内迄今尚无采用磁珠与质谱技术获得肺结核中医证候血清特征蛋白的报道。

发明内容

本发明的目的是为克服目前肺结核中医证候辩证技术未科学量化的不足，提供一种检测肺结核中医证候分型血清特征蛋白的质谱模型：从血清中筛选出5个蛋白作为特征蛋白，根据选取的5个蛋白质峰的质荷比m/z值及以该蛋白的临界峰值均值M，建立了肺阴虚证、阴虚火旺证及气阴两虚证肺结核患者鉴别的血清特征蛋白质谱模型；所述的特异蛋白质质荷比m/z值和临界峰值均值M分别为m/z=3961.7，M=3.37；m/z=4679.7，M=1.34；m/z=5646.4，M=2.01；m/z=8891.2，M₁=3.09，M₂=1.01；m/z=9416.7，M=8.35；分子量（m/z）误差﹤0.01%,临界峰值均值M的CV<5-10%。

本发明的另一个目的是提供检测肺结核中医证候血清蛋白质谱模型的制备方法，通过以下步骤实现：