[发明专利]ABO/RhD血型抗原检测试剂卡及其制备

说明书

技术领域：

本发明涉及一种血型抗原检测卡及其制备方法，具体是指采用微柱凝胶技术检测人血红细胞表面的血型抗原，涉及检测卡的组成、制备及其应用。

背景技术：

人红细胞血型是最早发现的人类血型，为人类的一种遗传标记，对人类遗传学、输血、组织配型、器官移植和新生儿免疫具有重要意义。

自1900年Landsteinor发现ABO血型以来，1907年Hoktoen首先提出血型鉴定对输血治疗的重要性，而1908年Ottenberg进一步提出了供受体血液交叉配血的概念，更进一步强调血型鉴定对临床输血的深远意义。输血是临床抢救病人生命的重要医疗手段之一，正确鉴定人ABO血型是安全输血的首要步骤，ABO血型不符在临床输血中会导致严重的继发性溶血性输血反应，危及人类生命。因此ABO血型的准确定性至关重要，是安全输血的基础和保障。

RhD血型系统是仅次于ABO血型系统的的重要血型系统，是人红细胞血型系统中最为复杂的一个系统。国际输血协会（ISBT）已确认RhD血型系统主要抗原有5种，分别为：D、C、c、E、e，其中D抗原最强。人红细胞表面含有D抗原的为RhD阳性，反之为阴性，中国汉族人群中RhD阳性的比例约占99.7%。RhD阴性人群接受RhD阳性血液后，会对D抗原发生免疫应答，并在第二次接触该抗原后发生溶血反应；另外，RhD阴性妊娠妇女的胎儿为阳性时，在分娩或流产时，胎儿红细胞可能会通过胎盘进入母体，导致母体对D抗原发生免疫应答，当再次妊娠时，可能造成新生儿溶血。

卫生部卫医法（2000）184号文件规定，每位供血及受血的个体均要进行ABO、RhD血型检测。

在国外、已有戴安娜、达亚美、强生等厂家生产用于ABO血型系统和RhD血型系统血型检测的检测卡，但其均采用葡聚糖凝胶或微玻璃珠，葡聚糖凝胶颗粒为70nm以上，颗粒较大、凝胶之间缝隙较大，易使血型检测卡的灵敏度降低，而玻璃微珠之间容易产生静电，对检测过程存在不同程度影响，此外，国外已有的大部分血型抗原检测卡为6个微柱的凝胶试剂检测卡，仅进行A抗原，B抗原和D抗原检测，无阴性对照，从而降低血型抗原检测卡结果的准确性，易导致ABO血型系统结果的错误报告。

在国内，也已经有长春博迅、江阴力博等企业也有类似的血型检测卡生产，其反应布局与国外试剂类似，无阴性对照，依然存在血型抗原检测卡结果的不准确而导致ABO血型系统结果的错误报告的风险，且质量相对于国外试剂质量，存在一定的差异。

中国专利申请（申请公布号：CN 101718794A）公开了一种ABO/RhD血型定性检测试剂卡的制备方法：选用30-60nm的聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶作为凝胶介质，每个空白卡上含有6个微柱管，形成6个微柱凝胶管的检测卡，6个微柱管分别为：抗A、抗B、抗D、阴性对照各一管，反定型检测2管。

中国专利申请（申请公布号：CN 101701961A）公开了一种ABO血型抗原检测试剂卡的制备方法：选用30-60nm的聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶作为凝胶介质，每个空白卡上含有6个微柱管，形成6个微柱凝胶管的检测卡，6个微柱管分别为：抗A、抗B、阴性对照各一管，反定型检测3管。

以上两种国内专利均不是单纯的血型抗原检测，在单独血型抗原检测领域使用易造成试剂浪费并增大工作量，且聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的选择、制备易受生产操作及环境的影响，使颗粒之间的间隙不够均匀，容易对对试剂灵敏度造成影响，使试剂质量不稳定。

发明内容：

本发明的内容旨在克服以上不足，提供一种高灵敏度、高特异性、质量稳定，能同时检测ABO血型抗原和RhD血型抗原，并能在一定程度上排除干扰的一种检测试剂卡的制备方法。

为实现上述目的，本发明以以下设计方案进行：

ABO/RhD血型抗原检测卡上具有8个微柱凝胶管，可检测2人份标本，微柱凝胶管分别为：两管含有IgM性质的抗A单克隆抗体、两管含有IgM性质的抗B单克隆抗体、两管含有IgM性质的RhD血型的抗D单克隆抗体，两管含凝胶缓冲液的空白凝胶卡，用于阴性对照。

制备方法及工艺过程：

一、凝胶悬浮介质缓冲液的配制：凝胶悬浮介质缓冲液的配方如下：

以上试剂用纯化水溶解，调整pH值为6.6-6.8。

二、凝胶制备：