[发明专利]醛化鹅新鲜红细胞及其在无细胞百日咳HA试验中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种无细胞百日咳检测工艺方法，对无细胞百日咳血凝实验HA(某此病毒或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝试验HA)中所采用的鹅新鲜红细胞进行戊二醛化，以改进鹅新鲜红细胞质脆易碎、保质期短的问题，与鹅新鲜红细胞相比，保质期从7天左右提高到90天，减少了采集鹅血的频率，降低了工作强度。

背景技术

百日咳（pertussis, whooping cough）是一种儿童急性呼吸道传染病，典型症状为突然阵发性痉咳，并带有吸气性尾声或伴有呕吐，可持续几个月，如无并发症出现，一般无高热或有轻度发热。本病最重要的并发症是继发感染，癫痫发作，脑病和死亡。百日咳在发病初期传染力极强，不易诊断，因此进行疫苗接种是预防和控制百日咳最经济最有效的手段。目前市场上的百日咳疫苗主要有全菌体百日咳疫苗和无细胞百日咳疫苗两种，后者免疫效果好且副作用低，因此被广泛使用。在无细胞百日咳发酵培养中，常用的检测方法是HA试验(在微量凝集板上，每孔加人生理盐水50μL，然后第1孔加入百日咳菌液50μL，混匀．依次倍比稀释至第10孔，同时另作生理盐水对照，之后每孔各加人50μL 1％新鲜红细胞悬液。同时振荡1min混匀，室温下静置15min后观察结果)。在HA试验中，需要使用的1%鹅新鲜红细胞存在质脆易碎，保存期短的缺点。

发明内容

本发明的任务是提供一种醛化鹅新鲜红细胞及其制备方法和醛化鹅新鲜红细胞在无细胞百日咳HA试验中的应用。

实现本发明的技术方案是：

本发明提供的醛化鹅新鲜红细胞是按以下方法制得的产物：

步骤一：用注射器吸取鹅静脉血约2～6mL，放入装有10mL生理盐水的离心管中混匀，离心机1500～2000 r/min  4℃， 离心8分钟，弃上清液，得沉淀物；沉淀物加入生理盐水10mL，混合均匀，再经1500～2000 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，得沉淀物，沉淀物加入生理盐水10mL，混合均匀，再经1500～2000 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜后得到的沉淀物即为鹅新鲜红细胞，将所得鹅新鲜红细胞于4℃保存备用；

步骤二：取鹅新鲜红细胞1mL，缓慢加入经4℃预冷的1.25%戊二醛溶液40mL，迅速摇匀, 置于4℃冰箱中用磁力搅拌器搅拌，反应40min后取出，得到鹅新鲜红细胞浓度为2.5%（体积比mL／mL）的醛化鹅新鲜红细胞悬液；

步骤三：将浓度为2.5%（体积比mL／mL）的醛化鹅新鲜红细胞悬液用0.9%无菌氯化钠溶液稀释到浓度为0.8%的醛化鹅新鲜红细胞悬液。

本发明提供的醛化鹅新鲜红细胞的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：用注射器吸取鹅静脉血约2～6mL，放入装有10mL生理盐水的离心管中混匀，离心机1500～2000 r/min  4℃， 离心8分钟，弃上清液，得沉淀物；沉淀物加入生理盐水10mL，混合均匀，再经1500～2000 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，得沉淀物，沉淀物加入生理盐水10mL，混合均匀，再经1500～2000 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜后得到的沉淀物即为鹅新鲜红细胞，将所得鹅新鲜红细胞于4℃保存备用；

步骤二：取鹅新鲜红细胞1mL，缓慢加入经4℃预冷的1.25%戊二醛溶液40mL，迅速摇匀, 置于4℃冰箱中用磁力搅拌器搅拌，反应40min后取出，得到鹅新鲜红细胞浓度为2.5%（体积比mL／mL）的醛化鹅新鲜红细胞悬液；

步骤三：将浓度为2.5%（体积比mL／mL）的醛化鹅新鲜红细胞悬液用0.9%无菌氯化钠溶液稀释到浓度为0.8%的醛化鹅新鲜红细胞悬液，此醛化鹅新鲜红细胞悬液置于4℃冰箱中放置保存，有效期为90天；

上述制备方法步骤二中所述的1.25%戊二醛溶液是按以下方法配制成的溶液：将25%戊二醛用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成1.25%戊二醛溶液，置于4℃冰箱中备用。

本发明提供的醛化鹅新鲜红细胞可用于无细胞百日咳HA试验。

实验资料：

１、采血

用注射器吸取鹅静脉血约2～6mL，放入装10mL生理盐水的离心管中混匀。

２、分离鹅红细胞