[发明专利]ISG15基因作为羊疾病抗性相关的分子标记及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及羊的分子标记辅助选择技术领域，尤其是一种ISG15基因作为羊疾病抗性相关的分子标记及其应用。

背景技术

疾病是影响畜禽生产效益的重要因素之一。现代化工业化的饲养方式不仅损害动物福利，使动物对疾病的易感性增加；同时也因人类与家畜的密切接触，增加了人畜共患病互感的可能性；而畜禽及产品的全球贸易流通以及交通的快速畅达，更增大了人畜共患传染病的流行频率，扩大了传染范围。虽然生物制品和抗生素的应用能在一定程度上缓解动物疫情，但疫苗和药物的使用只能预防、控制疾病而不能根除疾病，解决这一问题的根本途径是培育高抗病力的畜禽品种。

干扰素刺激基因15（IFN-stimulated gene 15，ISG15）是目前首个发现的类泛素蛋白，干扰素刺激及病毒感染均可以强烈诱导其表达。干扰素结合细胞膜受体，借助JAK-STAT信号通路激活ISG15的表达，进而编码抗病毒蛋白，达到抗病毒特性。ISG15及其对蛋白质的共价修饰可有效刺激细胞增殖和NK细胞成熟，产生IFN-γ蛋白，激活嗜中性粒细胞，促进树状细胞成熟，增强细胞抗病毒作用，因而在干扰素调控的过程中发挥着重要作用。

研究发现ISG15具有广谱抗病毒作用，其对I型人体免疫缺陷病毒、A/rWSN型流感病毒、B/Lee型流感病毒、I-型单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、日本脑炎病毒、呼吸道合胞病毒、痘苗病毒、重组Sindbis病毒、丙型肝炎病毒、Ebola VP40病毒、牛病毒性腹泻病毒都具有抗病毒作用。同时，ISG15在细菌感染、获得性免疫方面也具有重要的作用。

作为我国特有的宝贵绵羊品种资源，湖羊集性成熟早，早期生长快、繁殖力强、四季发情、泌乳性能好，及终年舍词、抗病力强等多种优异特性于一体。此外，湖羊具有的极强环境适应能力，在炎热潮湿的江南和干寒沙漠的西北，都能保持生长速度快、繁殖率高、抗病能力强等优良特性，因此，申请人开展了羊ISG15基因序列的克隆、SNP筛查与检测及其与羊疾病抗性的关联分析。

发明内容

本发明的目的正是要解决上述技术存在的不足，而提供一种ISG15基因作为羊疾病抗性相关的分子标记及其应用，作为羊标记辅助选择的、与羊疾病抗性相关的分子标记的克隆及应用，本发明的分子标记与ISG15基因有关。

本发明目的在于克隆与羊疾病抗性相关的分子标记，利用该分子标记作为羊标记辅助育种的应用。

本发明解决其技术问题采用的技术方案：这种ISG15基因作为羊疾病抗性相关的分子标记，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，在序列表SEQ ID NO：1的第235bp处有一个A235-C235的碱基颠换。

更进一步的，克隆羊ISG15基因的引物对的DNA序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。

所述的分子标记在羊分子标记辅助育种中的应用。

所述的引物对在羊分子标记辅助育种中的应用。

本发明所述的一种制备上述分子标记和检测上述分子标记的方法，该方法的步骤如下：

用羊ISG15基因设计引物，扩增得到目的片段；从羊外周血中提取基因组DNA，以羊ISG15基因DNA序列为模板设计引物，PCR扩增，PCR产物纯化和克隆测序，获得如序列表SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，应用PCR-SSCP方法检测羊ISG15基因的多态性，并初步进行了其基因型与羊疾病抗性之间的关联分析的应用，为羊的分子标记辅助选择提供了一个新的分子标记。

本发明有益的效果是：在湖羊群体中发现野生纯合型AA、突变杂合型AC和突变纯合型CC这3种基因型。本发明还公开了扩增ISG15基因部分内含子区所用的引物以及用于分子标记的检测方法。本发明为羊的标记辅助选择提供了1个新的分子标记。克隆与羊疾病抗性相关的分子标记，利用该分子标记作为羊标记辅助育种的应用。

附图说明

图1：是本发明的技术流程图。

图2：是本发明中羊ISG15基因扩增序列的电泳图谱，片段大小为313bp（琼脂糖胶浓度为1.5%）。图中M为DNA分子量标记（DL2000plus）。

图3：湖羊ISG15基因突变纯合型BB基因型个体序列的与牛全基因组数据库BLAST比对结果。

图4：是本发明中羊ISG15基因突变纯合型个体测序发现在序列表SEQ ID NO：1的235bp处有一个A235-C235的碱基颠换。