[发明专利]利用HPLC测定手性液液萃取水相布洛芬对映体浓度的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用HPLC法测定手性液液萃取体系水相溶液中布洛芬对映体浓度的方法。

背景技术

布洛芬(ibuprofen)[(R,S)-2-(-4-异丁基苯基)-丙酸]是一种重要的非甾体药物，因为其镇痛、消炎和退热的作用远比阿司匹林、保泰松和扑热息痛强而备受消费者青睐，多年来一直占据消炎镇痛类药物销售额的榜首。布洛芬分子α位是手性碳原子，存在一对光学活性异构体，化学结构式为：

现代药理实验证明，其药理活性主要是S-型布洛芬产生的，S-型布洛芬的疗效比R-型布洛芬高约160倍，且主要的毒副作用都是由R-型布洛芬引起的。因此制备单一的S-布洛芬给药可以显著减小剂量、提高疗效、减少对人体的毒副作用。液液萃取分离布洛芬对映体技术由于在生产过程中易于实现自动化的连续生产以及能耗低的优点，被认为是一项具有开发前景的拆分技术。故建立一种准确测定布洛芬两种对映体浓度的方法，对其生产有重大指导意义，也能够推进手性药物开发技术健康有序的发展。

迄今为止，仅有少量文献报道了布洛芬的色谱分析方法，主要由手性流动相添加法和正相色谱直接分析法两大类分析方法，前者比较有代表性的是李成平等（药物分析杂志，2005,25（4）：426-428）以Agilent Eclipse XDB-C₈柱作为分析柱，以水∶甲醇∶乙腈=78∶17∶5，其中羟丙基-β-环糊精的浓度是80mmol/L，0.2%磷酸，pH=4.50的液作为流动相，流速1.0ml/min，分离度约为1.42，两种对映体的保留时间分别为48min和56min，尽管该方法拆分效果尚可，但是分析时间过长，进行液液萃取实验时往往需要分析的样品较多，该分析方法不利于提高实验效率。关于正相色谱直接法，Crowther等研究者（Anal.Chem.,1984,56,2921-2926）以Pirkle型手性固定相附着于硅胶颗粒上作为手性填254nm检测波长下，以正己烷∶异丙醇=97∶3（体积比）作为流动相，在2ml/min的流速下实现了对布洛芬外消旋体的色谱拆分；宋少芳等（药物分析杂质，2002,22(1):50-52）以Chiral OD-H柱作为分析柱，以正己烷∶醋酸=99∶1作为流动相，成功的对布洛芬对映体实现了分离，该分析方法虽成功实现了布洛芬对映体的分离，但是存在的问题是作为流动相的色谱正己烷价格昂贵，另外该分析方法比较苛刻，溶解样品的溶液需为有机溶剂，且其极性不能大于流动相的极性，否则会降低分离度直至无法达到基线分离，不能满足手性液液萃取体系水相布洛芬对映体浓度的分析要求。因此迫切需要开发一种能够分析手性液液萃取体系水相溶液布洛芬对映体浓度的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用HPLC测定手性液液萃取水相布洛芬对映体浓度的方法，准确测定手性液液萃取水相布洛芬两种对映体的浓度。

申请人发现，以α₁-酸性糖蛋白类手性柱作为分析柱，以含有甲醇的磷酸钠-磷酸缓冲溶液作为流动相，在适当的检测波长和流速下可以将液液萃取体系水相溶液中的布洛芬对映体进行有效色谱分离，同时对于手性液液萃取体系，由于水相和油相经充分混合振荡，水相溶液中容易混入痕量有机溶剂，此时取样分析会引起色谱峰偏离基线，影响峰面积积分准确性，无法正确分离分析布洛芬对映体，加入甲醇能够显著改善这一状况。

本发明采用的检测波长为220nm±3nm时，其中检测波长为220nm时，紫外吸收强度适中，故检测波长优先选择220nm。

本发明采用的缓冲盐溶液的pH值范围6.5-7.0，使用pH值为7.0时，分离度最高，故选择pH值为7.0。

本发明的方法的流动相中，缓冲盐-甲醇混合溶液中甲醇的体积分数是0.5%-2%，选择甲醇体积分数为2%，原因在于保证达到基线分离的前提下，使用甲醇体积分数2%的流动相进行样品测试可以使分析时间最短，提高分析效率。

本发明所述的分离分析方法，可按照以下方法实现：

（1）待测样品溶液的制备

主要分为两种样品溶液的制备：

①将布洛芬外消旋体用磷酸盐/磷酸溶液溶解，配制成浓度为0.0006g/L-0.08g/L的溶液，通过色谱分析，得到布洛芬两种对映体浓度随峰面积的变化关系。

②以布洛芬外消旋体溶于磷酸盐/磷酸溶液得到0.08g/L的布洛芬外消旋体溶液作为水相，以L-酒石酸正戊酯的正辛烷溶液作为油相完成手性液液萃取实验，分液之后取水相布洛芬溶液过滤通过色谱分析得到水相中未知样品的峰面积。

（2）样品检测