[发明专利]巴戟天提取物在制备免疫佐剂的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药巴戟天提取物，尤其是中药巴戟天提取物作为主要有效成分用于免疫佐剂。

背景技术

免疫佐剂(immunologic adjuvant)即为增强抗原免疫原性，提高免疫效果的物质(周正任1981；潘杭君and孙红祥2004；夏芳，罗满林et al.2009)。佐剂用于疫苗免疫中已经有近百年的历史了。疫苗佐剂有三个关键的因素：毒副作用、增强免疫的强弱及佐剂的成本价格(Singh and O′Hagan 1999)。弗氏(Freund)佐剂自上世纪20年代便开始应用，将抗原水溶液与油剂等量混合，再加乳化剂制成油包水抗原乳剂，称之为弗氏不完全佐剂。弗氏完全佐剂是在不完全佐剂中加入分枝杆菌(如死卡苗)而制成。这两种弗氏佐剂都有很好的免疫促进作用，但是其副作用也很大(Woodhour，Metzgar et al.1964；周正任1981)。铝佐剂仍然是目前被批准唯一一类可以使用在人类身上的免疫佐剂。虽然其副作用小，对不少抗原都有一定的免疫增强作用，但是随着新疫苗的开发，其对一些抗原的免疫增强作用很小或没有，故新的安全有效的佐剂的开发迫在眉睫(潘杭君and孙红祥2004；Pashine，Valiante et al.2005；霍宁波2010)。

巴戟天(Morinda officinalis How)是为双子叶茜草科茜草属植物，是我国的四大南药之一(喻明洁2009)，盛产于我国福建、广东、海南、广西等地(乔智胜，吴焕et al.1991)。据临床研究其具有补元气、安五脏、强筋骨、补肾助阳、祛风除湿等功效(陈彩英，詹若挺et al.2009)，而补肾类免疫药中有不少能促进免疫细胞的增加和免疫功能的增强(梁丽敏and徐勇2011)。

发明内容

本发明的目的在于提供一种巴戟天提取物在制备免疫佐剂中的应用。

所述巴戟天提取物，是指南药巴戟天经过乙醇浸泡后的水提取物。

所述巴戟天提取物的制备方法如下：

将巴戟天粉碎，加入乙醇浸泡，再加入第1次水煮沸，第1次过滤，得第1次滤液和药渣，在药渣中加入第2次水煮沸，第2次过滤后，得第2次滤液，将第2次滤液和第1次滤液混合，浓缩后加入PBS缓冲液，第3次过滤后除菌，得巴戟天提取物，可冷冻保存。

所述乙醇的加入量按质量比可为巴戟天的4～6倍，最好5倍，所述乙醇可采用50％乙醇，所述浸泡的时间可为4～6h，所述第1次水的加入量按质量比可为巴戟天和乙醇总质量的3～5倍，最好4倍；第1次水煮沸的时间可为4～6h；所述第2次水的加入量可为所述药渣的4～6倍，所述第2次水煮沸的时间可为4～6h。

巴戟天提取物分别与灭活疫苗及DNA疫苗进行等体积混合，免疫豚鼠，与对照组弗氏佐剂做免疫佐剂做对比，巴戟天提取物做免疫佐剂，不仅豚鼠可以健康成长，而且豚鼠抗血清检测发现巴戟天提取物联合免疫组中豚鼠抗血清中较长时间内都能检测到高滴度抗体。由此可见，巴戟天提取物可作为主要有效成分用于制备免疫佐剂，即巴戟天提取物可用于制备免疫佐剂，是一种可以增强抗原免疫保护效果的安全有效的疫苗佐剂。可应用于传统的减毒疫苗、灭活疫苗、DNA疫苗、多肽疫苗及灭活蛋白疫苗的免疫保护中。

中药巴戟天中含有黄酮、蒽醌类、多糖、寡糖、有机酸和微量元素等成分(张海龙，张庆文et al.2010)，这些成分一般不会对接种动物(或者人)的健康造成危害产生副作用，还能增强被接种动物(或者人)的肌体的功能譬如甲状腺的功能，使他们健康成长；其中一些物质如多糖可以提高细胞免疫水平，提高免疫动物巨噬细胞吞噬百分率，提高肌体的免疫力水平(陈小娟，李爱华，陈再智1995；何传波，李琳et al.2009)。

巴戟天水溶性低聚糖单体混合成分对小鼠胸腺T淋巴细胞增殖反应有明显的促进作用；巴戟天水提液能增强单核吞噬细胞的廓清率及腹腔巨噬细胞的吞噬功能，提高机体的细胞免疫力；巴戟天还能提高小鼠脾淋巴细胞产生IL-2和INF-γ的水平，在体外促进小鼠体液免疫。

附图说明